【摘 要】
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G蛋白（guanine nucleotide-binding proteins）,又称为GTP结合蛋白,是具有GTP水解酶活性的一类信号转导蛋白,定位于细胞质膜内侧。三聚体G蛋白（Heterotrimeric G protein）是由α、β、γ三种亚基组合形成,每种亚基又有多种亚型,不同亚型间的组合及其下游效应决定了G蛋白功能的多样性。在5种Gβ亚基中,Gβ2在发育中的大脑皮质中高度表达。我们实验
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G蛋白（guanine nucleotide-binding proteins）,又称为GTP结合蛋白,是具有GTP水解酶活性的一类信号转导蛋白,定位于细胞质膜内侧。三聚体G蛋白（Heterotrimeric G protein）是由α、β、γ三种亚基组合形成,每种亚基又有多种亚型,不同亚型间的组合及其下游效应决定了G蛋白功能的多样性。在5种Gβ亚基中,Gβ2在发育中的大脑皮质中高度表达。我们实验室前期研究结果表明,Gβ2的表达在分化的神经元中显著上调,Gβ2表达受到干扰时,会影响迁移神经元。Gβ2由Gnb2基因编码,为了更好的研究Gβ2在发育中的作用,我们利用CRISPR/Cas9技术,构建Gnb2基因敲除小鼠。针对Gnb2的2号,5号和7号外显子区域设计了三个guide RNA（g RNA）,体外转录获得g RNA后,与Cas9蛋白混合注射到受精卵的原核区域。对获得的子代鼠通过PCR筛选和DNA序列分析,我鉴定得到了两种不同Gnb2基因片段缺失的小鼠。这两种基因片段的缺失情况均导致基因的移码突变,表现为纯合突变基因型(Gnb2-/-)Gβ2蛋白表达缺失。同时两种小鼠的基因型可以稳定遗传给子代,实现Gnb2基因敲除鼠的构建,我们选取了其中一种用于后续表型的分析。通过BrdU标记分析,发现Gβ2敲除鼠皮层深层神经元增多,ERK1/2磷酸化降低。在P7和P56小鼠鼠脑中,我们没有检测到鼠脑整体结构,皮层结构的明显区别,说明Gβ2缺失造成的迁移阻滞是暂时性效应,没有影响大脑皮层的构筑。同时,Gnb2基因敲除鼠中未见成熟神经元和胶质细胞标志物的表达异常。接下来主要围绕皮层锥体神经元的发育过程开展了研究工作。通过Thy1-YFP标记手段,统计分析了P56小鼠皮层锥体神经元的树突形态,结果显示Gβ2敲除没有影响皮层锥体神经元树突发育。进一步利用Thy1-YFP标记和高尔基染色技术,统计分析了P56锥体神经元的树突棘密度,两种方法均显示,Gβ2敲除导致皮层2-3层及5层锥体神经元的树突棘密度减低。通过电生理手段记录离体培养的神经元电活动情况,结果发现神经元细胞的膜通透性有明显改变。
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苦豆子（Sophora alopecuroides L.）别名为苦豆草、苦甘草,属于豆科槐属草本植物,主要分布于我国甘肃、宁夏和新疆等地区。主要含有生物碱、黄酮、香豆素等化学成分。其为我国新疆哈萨克族的传统药材,主治湿热痢疾、妇科炎症以及皮肤瘙痒等疾病。本实验对苦豆子地上部分化学成分进行了系统研究。以干燥的苦豆子地上部分为材料,采用70%乙醇热回流提取方法进行提取,提取物按极性依次萃取,对不同极性
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