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Sox(Sry-box containing)基因家族是一类与Sry(Sex determination Region of Y-chromosome)相关的转录因子,其成员均含有一个与Sry高迁移率族蛋白(High-mobility group,HMG-box)高度保守的结合域。Sox基因在动物界广泛存在,迄今为止已在人类、哺乳类、鸟类、鱼类以及果蝇中发现超过100个成员存在,根据HMG盒的相似性,将其划分为A-K 11个亚族。Sox3基因隶属于SoxB1亚家族,是位于X染色体上的单外显子基因,在神经系统和胚胎泌尿生殖脊的发育中起关键作用。因为Sox3与Sry基因同源相似性最高,因此有学者提出Sox3基因也许类似于Sry基因参与了性别决定过程。但是,目前有关Sox3基因在脊椎动物性腺发育中的具体功能还没有统一的定论。Sox5基因属于SoxD亚家族,其编码的蛋白在胚胎发育、细胞命运决定、软骨形成过程和精子的发生过程起重要作用。本研究采用普通聚合酶链式反应(PCR)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得中国大鲵Sox3和Sox5基因的全长序列,并对得到的序列进行生物信息学分析,最后利用实时荧光定量PCR技术对Sox3和Sox5基因在中国大鲵各组织中的表达情况进行分析。得到以下结果:1.中国大鲵Sox3基因cDNA序列全长为1396bp,包括151bp的5’UTR和348bp 的 3’UTR,CDS 长 897bp,编码 298 个氨基酸。NCBI 序列号为 KY745789。中国大鲵Sox3蛋白与其他脊椎动物Sox3蛋白经过DNAMAN软件比对,结果显示Sox3蛋白具有高度保守的HMG结构域,HMG结构域包含71个氨基酸,相似性分析结果显示中国大鲵Sox3的核苷酸和氨基酸序列与两栖类具有很高的相似性,与哺乳类相似性较低。系统进化树分析结果显示中国大鲵Sox3基因在非鱼类的脊椎动物中相似性极高,中国大鲵与红腹蝾螈处于一个分支并且与两栖动物、鸟类、爬行类、哺乳类以及鱼类的大群处于平行的分支节点。2.中国大鲵Sox5基因cDNA序列全长2930bp,包括159bp的5’UTR和446bp的3’UTR,CDS长2325bp,编码774个氨基酸。NCBI序列号为:KY745790。中国大鲵Sox5蛋白与其他脊椎动物Sox5蛋白经过DNAMAN软件比对,结果显示Sox5蛋白同样具有高度保守的HMG结构域,HMG结构域包含71个氨基酸,相似性分析结果显示中国大鲵Sox5的核苷酸和氨基酸序列与两栖类、爬行类都具有很高的相似性,与哺乳类相似性较低。系统进化树分析结果显示了中国大鲵不同物种间Sox5的进化地位,其中脊椎动物和无脊椎动物分别聚为一个群,在脊椎动物的大群之中,鱼类单独聚为一群,两栖类、鸟类、爬行类和哺乳类聚为一个大群,其中中国大鲵与鸟类、爬行类及哺乳类聚为一个亚群,而非洲爪蟾和高山倭蛙分别单独一个分支,结果显示中国大鲵Sox5基因的进化速率相比其他两栖类较快。3.利用实时荧光定量PCR方法分析中国大鲵Sox3、Sox5基因的组织表达情况,结果显示:中国大鲵Sox3基因在性腺发育成熟的雌雄个体间的表达量差异显著,精巢的表达量显著高于卵巢,预示Sox3基因可能对精巢分化和配子形成具有重大意义。中国大鲵Sox5基因在未成熟雄性中的性腺表达最高,在性成熟的雌性肾脏和卵巢表达最高,在性成熟的雄性的各个组织中的表达情况均较低。性成熟雄个体与未性成熟雄性的各个组织相比,在精巢的表达量差异最大,相比而言在性腺未发育成熟的雄性个体性腺中表达最高。Sox5基因在胰脏中的表达没有表现出雌雄个体差异以及时空差异。