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目的：树突状细胞（dendritic cell DC）在移植排斥反应过程中起着至关键性的作用，本实验旨在以大鼠骨髓源前体细胞为来源，探讨建立一种简易，高效的体外分离培养、纯化大鼠DC的方法，并就未成熟树突状细胞（immature dendritic cell，imDC）及成熟树突状细胞（mature dendritic cell mDC）在细胞形态学，细胞表型及细胞功能上进行鉴定，为DC在移植免疫耐受中的作用研究提供相关实验基础。方法：实验分imDC组（GM-CSF+IL-4）、mDC组（GM-CSF+IL-4+LPS）1．联合应用GM-CSF+IL-4分离诱导大鼠骨髓来源造血前体细胞7天后得imDC备用，光镜行形态学鉴定。2．取诱导培养至第7天的imDC进行免疫磁珠纯化，流式细胞仪检测免疫磁珠纯化前imDC及免疫磁珠纯化后imDC表面OX62阳性表达率。3．取免疫磁珠纯化后的imDC在原诱导培养基基础上添加终浓度为1ug/ml的LPS作用2天刺激imDC成熟，得mDC，光镜行形态学鉴定。4．收集imDC及mDC，流式细胞仪检测两组细胞表面CD86、CD80、RT1B阳性表达率， ELISA法检测两组细胞的IL-12分泌水平，体外混合淋巴细胞反应(mixedlymphocyte reaction,MLR)测定两组细胞促淋巴细胞增殖的能力。结果：以细胞形态观察、表面分子标志和功能状态三方面相结合对所培养细胞进行鉴定，证实了所培养细胞为DC。在光镜下imDC及mDC分别表现出典型不成熟及成熟形态，体外培养至第7天细胞光镜下见大量细胞集落，经LPS刺激2天成熟细胞光镜下见毛刺样突起明显增多，大部分细胞呈悬浮生长，细胞分布也较imDC均匀。免疫磁珠纯化前、后imDC表面OX62阳性表达率分别为82.8%、91.9%，纯化后imDC的细胞纯度高（两组相比P<0.05）。imDC表面CD86、CD80、RT1B阳性表达率分别是11.48%、6.25%、77.2%，经LPS刺激成熟后的mDC表面CD86、CD80和RT1B阳性表达率分别为91.38%、93.54%、98.6%（两组相比p<0.01）。ELISA法检测两组细胞的IL-12分泌水平，imDC为36±9pg/ml，mDC为228±27pg/ml（两组相比p<0.01），MRL结果中mDC组刺激T淋巴细胞增殖的能力明显高于imDC组（两组相比P<0.01）。结论：1．本实验通过细胞形态观察、表面分子标志和功能状态三方面相结合对所培养细胞进行鉴定，证实联合应用GM-CSF+IL-4可体外诱导出高纯度、数量多的DC。2．通过免疫磁珠纯化可获得相对数量多、纯度高的DC以满足实验需要。