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背景:神经胶质瘤简称胶质瘤,是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,约占所有颅内原发肿瘤的一半。根据世界卫生组织(WHO)分类,它是最致命的恶性和侵袭性癌症之一。由于浸润生长和容易复发的特性,导致预后较差和极高死亡率,患者的中位生存期(WHO IV级)只有14.6-17个月。目前的疗法主要有手术切除、放疗和化疗。其中化疗是治疗胶质瘤的主要术后辅助疗法。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是一种能显著抑制胶质瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的临床一线化疗药物。尽管TMZ在神经胶质瘤的治疗中普遍应用,然而由于先天或后天获得的胶质瘤细胞对TMZ药物的抗性使预后效果较差。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是长度约22个核苷酸的小非编码RNA,它能够通过与mRNA 3’非翻译区(3’-UTR)的碱基特异性互补配对,引起靶基因mRNA降解或者抑制其翻译。一些miRNA被证明在某些种类的癌症中异常表达,从而调控致癌基因和抑癌基因的表达。研究发现miR-181家族在调控神经胶质瘤生物学功能方面发挥重要作用,且作为一个肿瘤抑制型miRNA在人胶质瘤中较少表达。目的:探索miR-181b-5p及其靶基因Bcl-2在调控神经胶质瘤细胞对TMZ敏感性方面的分子机制。方法:1.MTT方法检测miR-181b-5p在调控神经胶质瘤细胞U87MG和U251对替莫唑胺(TMZ)敏感性的作用。2.免疫荧光检测miR-181b-5p、TMZ以及miR-181b-5p+TMZ组合对Ki67表达的影响。3.TargetScan预测miR-181b-5p的靶基因,并用双荧光素酶报告系统、Real-time PCR、Western blotting技术分析miR-181b-5p对靶基因的调控。4.Western blotting技术检测miR-181b-5p、TMZ以及miR-181b-5p+TMZ对细胞凋亡相关蛋白Bax以及周期相关蛋白CyclinD1和CDK4表达量的影响。5.流式细胞术检测miR-181b-5p、TMZ以及miR-181b-5p+TMZ组合对细胞凋亡和细胞周期的影响。6.Transwell小室法检测高表达miR-181b-5p、TMZ以及miR-181b-5p+TMZ组合对U87 MG细胞迁移、侵袭能力的影响。7.皮下接种法建立裸鼠人胶质瘤异种移植模型,检测miR-181b-5p、TMZ以及miR-181b-5p+TMZ组合对肿瘤生长的作用。结果:1.miR-181b-5p能够增强U87MG和U251细胞对TMZ的敏感性。2.转染miR-181b-5p、TMZ均能使细胞中Ki67的含量降低,且miR-181b-5p+TMZ处理组Ki67含量最低。3.TargetScan预测出Bcl-2是miR-181b-5p的潜在靶基因,双荧光报告实验、Real-time PCR、Western blotting证明miR-181b-5p能直接靶向Bcl-2且降低其表达。4.miR-181b-5p+TMZ组与miR-181b-5p、TMZ组相比,对提高凋亡蛋白Bax的表达量,促进U87MG细胞凋亡发挥更强的作用。5.转染miR-181b-5p、添加TMZ均能抑制U87MG的迁移和侵袭能力,且miR-181b-5p+TMZ的抑制作用最明显。6.转染miR-181b-5p、添加TMZ以及miR-181b-5p+TMZ均能降低周期蛋白CyclinD1和CDK4的表达量,且将细胞周期阻滞在S期,miR-181b-5p+TMZ的作用最强。7.成功构建人胶质瘤裸鼠肿瘤模型,miR-181b-5p能增强TMZ对肿瘤的抑制作用。结论:1.过表达miR-181b-5p能增强U87MG和U251细胞对TMZ的敏感性。2.miR-181b-5p能够通过靶基因Bcl-2抑制U87MG细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,miR-181b-5p+TMZ组合效果最明显。3.miR-181b-5p+TMZ组合处理比miR-181b-5p和TMZ具有更强的抑制裸鼠体内肿瘤生长作用。