目的：　　运用无血清悬浮培养法培养人MHCC97H肝癌细胞,使其成球生长并证明其具有干细胞特性，从而为MHCC97H肝癌干细胞的分选提供一种思路。同时探讨三氧化二砷对MHCC97H肝癌干细胞的作用效果及其内在机制。　　方法：　　运用体外克隆形成实验，免疫荧光染色和WB分别检测肝癌干细胞表面标记物CD133，CD90CD45的表达，进而对MHCC97H细胞球进行干细胞鉴定。用CCK8法检测MHCC97H肝癌干细胞球的OD值，将MHCC97H肝癌干细胞球接种至96板中，不同浓度（0μM、2μM、4μM、6μM、8μM）的三氧化二砷各处理12、24、48小时后，用倒置显微镜观察细胞球形态并向每孔加入10μl的CCK8溶液，在培养箱中继续孵育12个小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光值。每次重复三次，计算平均值。用最佳浓度三氧化二砷分别作用12、24、48小时后收集细胞，用流式细胞技术检测MHCC97H肝癌干细胞球凋亡情况。用Western Blot检测肝癌干细胞标志物CD90CD45及抗凋亡基因Bcl-2蛋白相对表达量；同时用Real-time PCR检测出抗凋亡基因Bcl-2的RNA水平。　　结果：　　1.MHCC97H肝癌细胞能在无血清悬浮培养液中培养出肝癌干细胞样细胞，并可在无血清培养基中连续传代，传代后球体生长快，形态呈类圆形。　　2.免疫荧光结果示：大部分MHCC97H肝癌细胞球呈现出了红色荧光，即CD133阳性表达，贴壁细胞表达阴性。WB结果示：MHCC97H肝癌干细胞球CD90CD45蛋白相对表达量较贴壁细胞高；体外细胞克隆增殖数较贴壁细胞明显增多。　　3.随三氧化二砷浓度的递增，MHCC97H肝癌干细胞球的形态及数目逐渐减小。CCK8结果示：三氧化二砷浓度为0μM、2μM、4μM、6μM、8μM的OD值分别为：0.831±0.050、0.846±0.007、0.723±0.076、0.633±0.021、0.570±0.074。与对照组（0μM）相比，浓度为2μM、4μM时示OD值轻度下降，差异无统计学意义（p>0.05）；浓度为6μM、8μM时差异有统计学意义（p<0.05）；但6μM与8μM相比无显著差异。结果提示三氧化二砷能在体外抑制 MHCC97H细胞球增殖，同时证明浓度为6μM三氧化二砷可能是最佳浓度组。　　4.流式结果示：12、24、48小时的凋亡率分别为3.063±0.073、3.537±0.042、4.110±0.159，相对于（0小时）0.097±0.032而言，随时间延长肝癌干细胞凋亡率逐渐增加，差异具有统计学意义（p<0.05）；实验表明肝癌干细胞的凋亡率呈时间依赖性。　　5.Western Blot结果显示：药物作用12、24、48小时后CD90的蛋白相对表达量分别为：0.160±0.010、0.130±0.010、0.100±0.010，相对于（0小时）对照组0.167±0.032而言，CD90的蛋白表达量12小时后轻度下降，无统计学意义（p>0.05）；24小时及48小时后下降明显，差异有统计学意义（p<0.05）；CD45阴性表达。说明三氧化二砷能抑制肝癌干细胞表面标志物的表达.　　6.Western Blot和Real-time PCR的结果显示：药物作用12、24、48小时Bcl2的蛋白相对表达量分别为：0.427±0.021、0.377±0.025、0.247±0.035；RNA相对表达量分别为：2.740±0.257、3.060±0.308、3.720±0.235。相对于（0小时）对照组而言，Bcl-2的蛋白及RNA表达量12小时后轻度下降，差异无统计学意义（p>0.05）；24小时及48小时后下降明显，差异有统计学意义（p<0.05）。说明三氧化二砷能通过下调Bcl-2的表达促进肝癌干细胞的凋亡。　　结论：　　1.MHCC97H肝癌细胞能在无血清悬浮培养液培养出肝癌干细胞。　　2.三氧化二砷能在体外抑制肝癌干细胞增殖并促进其凋亡。　　3.三氧化二砷下调Bcl-2的表达促进肝癌干细胞的凋亡。