【摘 要】
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本论文利用花菁类核酸染料SG与Hemin的相互作用,并降低Hemin催化活性的现象,建立了一种新的DNA酶-SG化学发光体系,成功应用于DNA的检测。实现发现,游离的SG能有效抑制Hemin的催化
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本论文利用花菁类核酸染料SG与Hemin的相互作用,并降低Hemin催化活性的现象,建立了一种新的DNA酶-SG化学发光体系,成功应用于DNA的检测。实现发现,游离的SG能有效抑制Hemin的催化活性,从而降低游离Hemin及游离的富G序列形成的分子间G-四聚体DNA酶所产生的空白信号。通过米氏常数及最大反应速率的测定、化学发光动力学研究、荧光光谱的变化等实验,验证了SG与Hemin间的相互作用过程和抑制Hemin的催化活性现象。根据目标DNA序列设计对应的探针DNA序列,目标DNA与探针DNA通过碱基互补配对形成双链DNA和较稳定的分子间G-四聚体结构,Hemin与G-四聚体复合形成DNA酶提高体系的催化活性,SG嵌入双链DNA的小沟槽后,减少了SG与Hemin的相互作用,化学发光信号恢复,体系的信背比得到显著提高。并查阅文献推断体系中可能存在分子内光催化现象。在最优实验条件下,DNA酶-SG化学发光检测p53基因在5.0pM-5.0nM浓度范围内与体系信背比呈现良好的线性关系,最低检出限可达到2.0pM(3σ)。该方法具有比较好的选择性和重复性。根据实验结果,得到以下结论: (1)部分核酸染料(SG、PG等)会与Hemin相互作用,从而降低Hemin的催化活性; (2)与传统的DNA酶体系相比,DNA酶-SG体系有效降低了Hemin及富G序列产生的空白信号,并通过目标物的识别可以实现信号的有效恢复,大大提高了实验的信背比; (3)DNA酶-SG体系无需标记、其他辅助酶和信号放大步骤,可以实现DNA的高灵敏检测; (4)通过改变探针DNA目标识别区域序列可以将该方法应用于检测不同的DNA、RNA,以及特殊的金属离子Hg2+、Ag+等,因而具有广阔的应用前景。
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