牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是一种重要病原微生物,主要引起以牛呼吸系统病。近年来,给国内外养殖业造成巨大的经济损失,但国内外在M.bovis免疫方面的研究还不成熟,并且没有治愈的特效药物。免疫预防是防制牛支原体病的重要手段之一,本研究在成功制备出了M.bovis灭活疫苗,通过对家兔进行免疫效果评价的基础上对犊牛进行免疫效果评价试验的基础上,系统开展了牛支原体灭活疫苗免疫犊牛后的免疫效果评价,预防效果明显。主要研究内容有:1.宁夏回族自治区永宁县牛支原体血清学检测对永宁县10个规模化养牛场按照不同月份随机抽取312份血清进行支原体检测,结果发现发现:牛支原体阳性数为33.65%(105/312),牛支原体的最高阳性率为100%,最低阳性率为7.41%,场群阳性率为100%;奶牛场的支原体阳性率远高于肉牛场的阳性率,其中西F1杂交的牛支原体阳性率最低,荷斯坦与西F1杂交牛之间牛支原体阳性率的差异性显著(P<0.05),秦川牛和安格斯牛种间差异不显著(P>0.05);牛支原体疾病在4月份流行最为严重。以上数据可以表明:支原体在永宁县均有不同程度的流行,西F1杂交牛对牛支原体的的抗病能力相对试验中的其他牛种强,不过这可能还跟引种、养殖环境有关。2.中药提取筛选及动物毒性试验根据牛支原体疾病病症及中药治疗效果,初选21味中药用牛津杯法体外药敏试验和药敏纸片琼脂扩散法体外药敏试验,结合中药方剂的配伍禁忌与加减原则配成了共含有黄连、生地、丁香等12味中药构成组方。对自制中药复方制剂进行了粘膜刺激试验与急性毒性试验安全性评价,粘膜刺激试验结果显示本复方制剂对粘膜无刺激性,急性毒性试验测得该药物腹腔注射的半数致死量的可信限范围为39490.26~43482.05mg/kg,标准误Slog LD50=0.01067,药物毒性远远小于国家规定毒性标准,证实该药物安全无毒,所以可在临床上安全使用。3.中药制备及M.bovis药物治疗效果评价犊牛牛支原体疾病所引发的病症大多数为呼吸道疾病,抗生素是目前常用治疗药物,但随着药物耐药性的产生,及犊牛感染牛支原体后眼部疾病症状的出现,给诊断及治愈带来很大的困扰,为此,本研究用黄连、苦参、鱼腥草、大黄、黄柏等12味中药十几种中药配置的中药制剂、抗生素治疗对感染牛支原体的犊牛进行治疗试验。通过将实验室分离的支原体NP2株成功感染于试验动物,制造病理模型,试验中观察各项临床症状、生理指标、剖检及病理学组织切片,结果显示:经过中药治疗感染牛支原体犊牛的内脏、组织向阴性对照组转归,即病症逐渐消除至康复;而抗生素治疗的犊牛脏器继续受到牛支原体的侵蚀,呈阳性组的临床症状。结果表明,中药制剂对牛支原体治疗效果显著,且不产生耐药性,且值得推广于养殖行业。4.制备M.bovis灭活疫苗,牛体免疫效果评价为了研究牛支原体甲醛灭活菌株配合白油佐剂通过肌肉注射对牛支原体疾病的预防效果,设立PC组、NC组和灭活疫苗组进行临床试验。通过对临床症状,ELISA技术对特异性抗体水平检测、病理剖检和病理组织学分析进行疫苗免疫效果评价。结果发现,灭活疫苗组体温正常,与NC组差异不显著(P>0.05),抗体水平在第1次免疫后两周达到阳性,病理剖检未见肉眼可见病理变化,组织学分析肺脏、气管组织正常。结果表明,本研究的牛支原体灭活疫苗对于牛支原体疾病的预防具有良好的效果,对于后期疫苗的研究具有重大的参考价值。