慢性饮酒对大鼠大脑中动脉平滑肌细胞BK通道电流的影响及维生素C的保护作用

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目的:研究慢性饮酒对大鼠大脑中动脉平滑肌细胞(middle cerebrAlartery smooth muscle cell, MCASMC)大电导钙激活钾通道(high-conductance Ca2+-activated K+channel, BK通道)电流的影响及维生素C的保护作用。   方法:备动物模型,将健康雄性SD大鼠随机分为三组:正常对照组,饮酒组和维生素C组。对照组大鼠自由饮水;饮酒组大鼠前12周按2~4g/(kg·d)的浓度自由饮酒,后8周自由饮用含20%(V/V)酒精的水,共饮酒20周;维生素C组是在饮酒组大鼠所饮酒水的基础上加入0.05%(W/V)的维生素C片,溶解后饮用20周。急性酶解法分离大鼠MCASMC,利用全细胞膜片钳技术记录BK通道的电流,观察慢性饮酒对大鼠大脑中动脉 BK通道电流的影响及维生素C的干预作用。   结果:两步酶解法分离得到大鼠MCASMC,细胞多呈梭形,膜表面光滑,轮廓清晰,其外形在对照组、饮酒组和维生素C组之间无显著差异。电压钳模式下测定三组大鼠MCASMC膜电容,分别为15.33±1.36 pF、13.50±1.96 pF和13.44±3.20pF,各组之间均无显著差异(P>0.05)。阶跃方波脉冲方案,钳制电位-80mV,从-60mV 起以10mV阶跃除极至+80mV,测试500ms,采样间隔5s,采样频率5kHz。绘制电流-电压关系曲线,结果证实BK通道电流呈电压依赖性,从+20mV开始呈明显的外向整流特性。记录BK电流,测试比较不同膜电位下大鼠BK通道的电流情况,从+40mV开始除极至+80mV,饮酒组与对照组相比,大鼠MCASMC BK通道电流均显著下降;从-60mV至+80mV,维生素C组与饮酒组相比电流均显著升高,此外在+10mV和+30mV,维生素C组比对照组也有显著升高(P<0.05)。在单电压60mV脉冲刺激下得到大鼠MCASMC的BK通道电流值,饮酒组较对照组显著降低(5.271.27pA/pFvs17.54±±7.77pA/pF,P<0.01),维生素C组较饮酒组显著升高(14.446.36pA/pFvs5.27±±1.27pA/pF,P<0.05)。采用斜坡脉冲方案,从-50mV连续除极至+100mV时电流达最高,记录并比较峰值电流,饮酒组较对照组显著降低(9.911.94pA/pFvs30.18±±10.67pA/pF,P<0.01),维生素C组较饮酒组显著升高(24.198.72pA/pFvs9.911.94pA/pF,P<0.05)。±±   结论:1.慢性饮酒对大鼠大脑中动脉平滑肌细胞BK通道电流具有抑制作用;2. 长期给予维生素C可拮抗慢性饮酒对大鼠MCASMC BK通道的抑制作用。
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