高产Monacolin K红曲霉的生理生化性质及其PKS基因的原核表达质粒构建

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wlxingyun
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
据统计,近年来世界各国各种疾病的发病率和死亡率统计中,心脑血管疾病占第一位。这类疾病主要是由于血液中积聚过多的胆固醇造成的。因此,如何降低血液中胆固醇的含量成为攻克心血管疾病难题的金钥匙。 人体内只有1/3的总胆固醇来源于食物,其余2/3由肝脏和小肠合成。产自红曲霉的次级代谢产物莫纳可林K(Monacolin K),能有效抑制胆固醇的合成,大大降低机体内胆固醇的含量,从而解决了心血管病患者的困扰。 Monacolin K属于聚酮体化合物,由聚酮体合成酶(PKSs)合成,是PKSs基因家族的产物。国外在一些真菌的PKSs领域进行了卓有成效的基础理论研究,但对红曲霉的PKSs基因报道甚少。 本文对实验室获得的一株高产Motlacolin K的红曲霉突变菌株及其野生株进行了基本的生理生化性质研究。发现该突变株在菌落形态上发生了较大的改变;生长速度较野生株有较大幅度地降低;最适生长温度介于30~33℃之间。能利用实验室常见的17种碳源,但无法对甘油、木糖和果糖等碳源进行发酵产气。有机复合氮源较无机氮源更有利于其生长。 这株红曲霉突变株在产红曲色素的表现上也非常突出。本论文由检测方法,最佳温度、最佳碳源、氮源等角度对这株菌的色素生产进行了研究。确定其发酵液在波长为409nm、501nm处有两个强烈的吸收峰,适用于色价的检测;最佳色素生产温度为30℃;葡萄糖是色素生产的最佳碳源;氮源对色素合成的影响很大,其中硝酸盐对红色素的生产有刺激作用,而铵盐则有利于黄色素的合成。 本论文对以高效液相色谱法检测Monacolin K作了初步的研究,确定本实验室条件下适宜用配比为65:35的乙腈.磷酸水溶液作为流动相;保留时间为11.2 s;以及检测标准曲线和产量曲线的绘制等。 根据PKS基因的cDNA序列将其从红曲霉突变株和野生株的总DNA组中扩增出来,并进行比对,证明此段基因不含内含子,并且突变株在该段基因上没有发生碱基突变。在NCBI网站上进行比对,此序列与黄曲霉毒素醛还原酶有很高的同源性;并对其做了结构域和蛋白三维结构的预测。 设计两条引物In-F和In-B从红曲霉Palosus IFO 4520中扩增出一段PKS基因,纯化后连接至T载体上,得到克隆载体pMD19-Mona。双酶切pMD19-Mona克隆质粒和pGEX-4T-2表达载体质粒,得到目的基因片段和载体片段,连接后转入大肠杆菌BL21(DE3),经筛选和鉴定后确定原核表达载体pGEX-4T-Mona构建成功。本论文对实验室获得的一株高产Monac01in K红曲霉突变菌株进行了较为系统的研究。为此菌株的应用开发,以及为利用生物工程方法构建高产Monacolin K的工程菌奠定基础。
其他文献
期刊
航椒穴盘育苗可提高秧苗的质量及定植成活率,育成的秧苗适于长途运输,因此,辣椒穴盘育苗技术是辣椒生产向规模化、集约化、产业化发展的重要环节。辣椒穴盘基质育苗是一项在
生态风险评价是随着环境管理目标和环境观念的转变而逐渐兴起并得到发展的一个新的研究领域。生态风险评价在保护生态环境、维护公众健康和发展经济过程中起着重要的作用,是实
永磁技术的进步,引领了电机发展的一个新的趋势。永磁电机与传统电励磁发电机相比,省去了电刷、励磁绕组、集电环等装置,在结构上也更加紧凑简单,便于生产维护,还具有无励磁损耗、功率因数高等优势。但是,电机在运行过程中会不可避免的产生损耗,这些损耗会以热量的形式表现,持续的高温会使永磁电机转子上的永磁发生退磁或者是不可挽回的失磁和绝缘老化进而出现短路现象。永磁电机一旦失磁,会使电机的输出电压下降,对并网运
水稻种子是世界上半数以上人口的主食来源,而传粉和受精则是形成种子的关键步骤。因此,研究水稻传粉受精的分子机制,对了解其传粉受精的控制机理及其遗传改良具有重要的意义。利
学位
为研究乌鲁木齐市河滩快速路林带对PM2.5、PM10质量浓度的影响,在河滩快速路南段燕儿窝风景区2种配置结构的混交林带内0、3、10、20、30、50 m处设置观测点,于2019年4月1日至
以15年生开心形和疏散分层形的库尔勒香梨树作为试验对象,测定其叶绿素含量、净光合速率—光响应曲线、光合速率日变化及光合有效面积等指标,分析了两种树形在光能利用效率上
区域间低频功率振荡是影响大规模互联电网安全稳定运行的重要因素。近年来,我国电网除了发生由系统阻尼不足引起的弱/负阻尼低频振荡和由外部持续、周期性小扰动引起的强迫功率振荡之外,还多次发生了由强模式谐振导致的强迫功率振荡。强模式谐振作为一阶模式谐振的一种,是指当电力系统的运行参数或控制器参数发生摄动后,两个密集的振荡模式可能会彼此靠近而发生相互作用的现象。为了充分理解和揭示强模式谐振条件下,一个模式作
In this paper we study the three new asymptotic-norming properties which are called locally asymptotic-norming property К, К=Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, and discuss the relat
期刊