联苯苄唑在人肝癌细胞的放疗增敏效果试验研究

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目的:通过体外实验探讨联苯苄唑对人肝癌细胞HepG2的放疗增敏效果,为进一步动物模型和在体临床试验提供理论依据。  方法:常规培养人肝癌细胞HepG2,实验分成4组,即空白组、放疗组、联苯苄唑组、联苯苄唑+放疗组,每组设3个复孔。联苯苄唑设置5个浓度,分别为0.75、1.5、3.0、6.0和8.0mmol/L,细胞照射条件采用军事医学科学院放射与辐射医学研究所60Coγ射线,剂量率为85.69cGy/min。分别培养24h、48h和72h后,采用MTT法检测各组癌细胞的增殖率,计算半数抑制浓度(IC50),克隆形成实验检测放射增敏作用,流式细胞术检测凋亡水平和细胞周期分布,反转录PCR(RT-PCR)法检测凋亡相关基因Bax/Bcl-2、p53和Caspase-3水平,Western blot法检测对应蛋白的表达水平。  结果:1.空白组的细胞增殖率随培养时间延长而增加,放疗组明显低于空白组,于48h达最小值,72h回升;联苯苄唑组的细胞增殖率与空白组相当;联苯苄唑+放疗组明显低于放疗组,且随培养时间延长而降低;差异均有统计学意义(P<0.05)。联苯苄唑的放疗增敏效应表现明显的浓度依赖性,各时间点的细胞增殖率随联苯苄唑的浓度增加而降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。  2.联苯苄唑+放疗组培养24h、48h和72h的IC50值分别为3.57mmol/L、1.73mmol/L和0.85mmol/L。  3.空白组和联苯苄唑组的细胞克隆数目明显高于放疗组,联苯苄唑+放疗组最少,并且随着培养时间延长和联苯苄唑的浓度增加而明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。  4.空白组和联苯苄唑组的细胞凋亡率明显低于放疗组,联苯苄唑+放疗组最高,并且随着培养时间延长和联苯苄唑的浓度增加而明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。联苯苄唑+放疗组细胞周期中G0和G1比例明显增加,S和M期明显降低。  5.联苯苄唑+放疗组细胞Bax/Bcl-2、p53和Caspase-3mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。  结论:体外人肝癌细胞HepG2对放疗有一定的抵抗性;单纯联苯苄唑对人肝癌细胞HepG2无明显增殖抑制效应,但联合放疗有较好的增敏效果,且联苯苄唑表现浓度和时间依赖性;联苯苄唑的放疗增敏作用可能与促进细胞凋亡机制有关。
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