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慢性乙型肝炎是严重威胁人类健康的疾病之一,它是由乙型肝炎病毒的感染引起的。患者体内针对病毒的特异性细胞免疫功能低下,无法及时、彻底清除病毒,由机体产生的非特异性免疫反应造成了肝组织的慢性病理损伤。所以能够引起强烈细胞免疫应答的“prime-boost”免疫策略成为乙型肝炎免疫治疗的有力策略。我们构建了表达病毒表面抗原的DNA疫苗和重组痘病毒(MVA)载体疫苗,采取“prime-boost”免疫方案免疫小鼠。因为DNA疫苗的免疫原性较弱,所以利用细胞因子作为佐剂来增强疫苗的免疫原性。同时在乙肝转基因小鼠上考察此种免疫方案的治疗作用。 本论文共选择IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSF和IFN-γ六种鼠源细胞因子佐剂。论文第一部分实验以普通小鼠为动物模型,用细胞因子与HBV DNA疫苗同时免疫小鼠,然后以重组痘病毒疫苗加强免疫,检测不同细胞因子或其组合对HBV DNA疫苗的免疫加强作用。结果表明:1 在增强疫苗体液免疫和细胞免疫反应方面,IL-2质粒要强于IL-2蛋白,所以要选择质粒形式的细胞因子作为佐剂。2 在增强疫苗细胞免疫反应方面,IL-12、IFN-γ和IL-2要强于其它细胞因子,而GM-CSF和IL-2在增强体液免疫反应方面要更有优势。3 GM-CSF和IL-2两种细胞因子联合应用具有协同作用,在增强疫苗的体液和细胞免疫反应方面比单独应用有优势。论文第二部分实验以乙肝转基因小鼠为动物模型,考察所构建疫苗的免疫治疗作用。检测疫苗免疫前后转基因小鼠的体液和细胞免疫反应以及其它生理、生化指标。结果表明“prime-boost”免疫策略可以打破部分转基因小鼠对病毒的免疫耐受,HBV病毒定量和抗原转阴、抗体产生、同时造成一定程度的病理损伤,而DNA疫苗单独免疫则没有治疗作用。