【摘 要】
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Luffin是存在于丝瓜籽中的一组单链核糖体失活蛋白,包括LuffinA、LuffinB及本组发现的新型小分子核糖体失活蛋白LuffinS.其中LuffinB是迄今报道的毒性最强的单链植物核糖失活
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学
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Luffin是存在于丝瓜籽中的一组单链核糖体失活蛋白,包括LuffinA、LuffinB及本组发现的新型小分子核糖体失活蛋白LuffinS.其中LuffinB是迄今报道的毒性最强的单链植物核糖失活蛋白之一,具有很强的蛋白质生物合成抑制活性,是免疫毒弹头的理想候选对象.目前,LuffinB已被成成功地制成免疫毒素,用于肿瘤的的治疗研究.最近,Au等还发现LuffinB能够强烈抑制HIV-1病毒复制,更引起了人们的极大兴趣.因而深入开展LuffinB的研究将是十分有意义的工作.该文第一章用CM-52阳离子交换层析和Blue-Sepharose CL-4B亲和 层析纯化了Luffin B.第二章对单抗的亚型、专一性、亲和常数等性质及其作用作进一步的研究.此外我们还制备了1E5单抗-辣根过氧化物酶RT-PCR方法从未成熟的丝瓜籽中克隆Luffin B基因,构建了Luffin B表达载体pET24a(+)-Luffin b,以大肠杆菌(E.Coli BL21 DE3)表达系统对Luffin B的表达作了研究.第四章以拼接PCR法,构建了hGMCSF-Luffin B基因工程重组免疫毒素.并在hGMCSF与Luffin B之间插入了白喉毒素的转位domain及trypsin酶切位点,以期重组免疫毒素在靶细胞内发生有效的转位,并产生良好的细胞毒性.对表达载体-pQE30h-GMCSF-Luffin B转化的大肠杆菌(e.coli M-15)在IPTG诱导下的表达进行了研究.
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