早在上个世纪七十年代，人们就在中国的卷心菜中发现了可以催化植物RNA病毒复制的物质，并命名为RNA依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp），起初认为行使这一功能的是植物RDR。随着研究的深入，研究者发现，行使这一催化功能的是病毒自身的RdRp，而非植物的。这一重大发现使得植物RDR成为新的研究热点。到目前为止，已在多种植物中分离得到了RDRs基因，拟南芥、烟草、番茄、豇豆、黄瓜、水稻等。植物RDRs是一个复杂的家族，现已在拟南芥中分离了六个同源基因。本文以心叶烟（Nicotiana glutinosa）为实验材料，首次从心叶烟中克隆得到RDR基因（NgRDR6），并对其进行了序列比对，表达特性分析及初步功能鉴定，为进一步研究该基因的功能及作用机理奠定了基础。主要研究结果如下：　　 1、利用RT-PCR和RACE-PCR得方法，首次从心叶烟中克隆得到了一个RDR基因，命名为NgRDR6。该基因GenBank注册号为FJ490363。序列分析结果表明，NgRDR6 cDNA全长为3，921 bp，包括3，594 bp的开放阅读框（ORF），123 bp的5’非编码区（5’UTR）和204 bp的3’非编码区（3’UTR）。该基因编码一个1，197个氨基酸残基的多肽，预测分子量为135.472 kDa。通过同源性比较发现，心叶烟RDR6与其它植物RDR6的同源性很高，如与水稻RDR6的同源性达57.92％，而与拟南芥RDR6的同源性更高达65.00％。NgRDR6含有RDRs家族所有的保守区。进化分析表明NgRDR6与植物RDR6聚集成簇，而与其它RDRs的进化关系较远。NgRDR6基因组全长5，696 bp，包含两个内含子，内含子大小分别为1，140 bp和644 bp。其中，内含子1位于5’UTR内，推测该内含子可能具有特殊的功能。　　 2、利用半定量PCR的方法，研究了NgRDR6在多种生物和非生物因素诱导下mRNA水平的表达情况。研究表明，NgRDR6可以在非生物因素ABA、GA和MeJA处理的情况下高水平表达，且在接种真菌烟草立枯病菌和烟草炭疽病菌及CMV后，NgRDR6 mRNA水平持续高水平表达达数天。而在PVY，TMV，H2O2和SA处理的情况下，NgRDR6 mRNA水平的表达量无明显变化。对克隆得到的启动子序列进行分析，发现了多个响应植物激素的特殊作用元件，如响应GA和MeJA的元件，而且还找到了响应外界胁迫的元件。这些元件的存在，也许可以解释NgRDR6在多种非生物因素处理下的表达情况。　　 3、将NgRDR6 cDNA全长连入pB1121载体，构建得到了NgRDR6正义表达载体，采用农杆菌介导的方法，转化本生烟（Nicotiana benthamiana），同时转空载体为对照。经卡那霉素筛选获得若干再生植株。经过PCR鉴定及半定量RT-PCR分析，结果证明NgRDR6在转基因烟草中得到成功表达。　　 4、将鉴定好的T0转基因植株选取两个株系进行自交繁育得到T1代。对T1进行遗传分析，发现两个株系均基本符合3:1的分离规律。在抗病毒试验中，分别接种PVY、TMV和CMV后，转基因植株只对PVY表现出较明显的抗性。