论文部分内容阅读
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见的一种内分泌失调和生殖功能障碍性疾病，临床表现主要为月经失调、不孕、多毛和肥胖等，伴有胰岛素抵抗、高胰岛素血症和高脂血症等代谢异常。其发病机制至今不清，但基于PCOS患者具有家族遗传性和异质性的特点，强烈提示PCOS是由遗传和环境两方面共同作用产生的。表观遗传学是研究基因产生表型的过程，是一种不通过改变DNA序列而能调节基因表达的分子现象。PCOS表观遗传学异常假说提供了一个研究PCOS发生和遗传的新思路。 第一部分:PCOS患者外周血标本DNA甲基化谱的建立 目的:通过甲基化芯片高通量筛选，获得PCOS疾病外周血相关DNA甲基化谱。 方法:根据临床资料，选取符合诊断标准的PCOS患者（5例PCOS胰岛素抵抗，5例PCOS非胰岛素抵抗）以及5例正常对照的外周全血，分别进行DNA甲基化芯片检测，并将数据结果进行分子功能注释及GO分类筛选。 结果:筛选出一套PCOS疾病相关的DNA甲基化谱，包括引起PCOS-IR的甲基化谱。 结论:(1)芯片技术是研究基因组DNA甲基化谱的有效手段，(2)通过GO数据库以及MAS在线分析可为芯片数据提供大量注释，(3)构建PCOSDNA甲基化谱具有较高应用价值。 第二部分:PCOS外周血标本甲基化芯片实验部分结果验证 目的:通过对FAT、MAT2B两个PCOS候选基因部分甲基化位点的验证，验证甲基化芯片实验的结果。 方法:(1)对进行芯片实验的PCOS患者（10例）Diane-351＃，QD，PO治疗，三月后复查疗效;(2)将进行芯片实验的外周血标本DNA（15例），以及PCOS组(10例)治疗三月后、新对照组（5例）外周血标本DNA进行FAT、MAT2B、两个基因使用EpiTYPER检测甲基化水平。 结果:(1)10例患者均达到临床缓解;(2)PCOS组FAT、MAT2B两个基因的甲基化水平与对照组有统计学差异。 结论:(1)FAT、MAT2B两个基因的甲基化芯片数据可靠;(2)EpiTYPER是一种快速有效检测DNA甲基化的手段。 第三部分:DNA甲基化与PCOS胰岛素抵抗的研究 目的:通过甲基化芯片筛选与PCOS胰岛素抵抗有关的候选基因，并验证之。方法: (1)将参加芯片实验的PCOS患者接受Diane-351#，QD，PO治疗;其中PCOS-IR组接受二甲双胍500mg，TID，PO治疗，治疗三月后随访临床疗效; (2)根据基因芯片结果筛选与IR相关的候选基因; (3)对照临床治疗结果，使用EpiTYPER方法，分别检测治疗前后候选基因的甲基化水平，验证候选基因的作用。 结果:KCNH7共检出5个具有显著差异的位点，针对IR的治疗对其中4个位点的有作用。 结论:KCNH7的甲基化水平与PCOS胰岛素抵抗有关，可能是参与调控PCOS的胰岛素抵抗的相关基因。