论文部分内容阅读
本论文综述了根瘤菌多样性、分类和多相分类技术的研究进展;采用表型分析(103项生理生化测定,数值分类)和遗传型分析(16S rDNA PCR RFLP,16S rDNA基因全序列分析,nodA和nifH PCR RFLP)等多相分类技术,对分离自我国西北部分地区草木樨属根瘤菌,首次系统进行了多相分类和系统发育研究。生理生化测定结果表明,西北部分地区草木樨属根瘤菌能够利用广泛的碳氮源,对抗生素及染料也有较好的抗性。数值分类中,在92.5%的相似水平上供试菌株分为两大分支,分支Ⅰ由56株供试菌株与参比菌株S. meliloti组成;分支Ⅱ由CCNWSX0003-1、CCNWSX0003-2、CCNWGS0008、CCNWGS0001-2、CCNWNX0025-1 5株菌与参比菌株S. medica和S. arboris聚群;菌株CCNWSX0004-1与参比菌株R. leguminosarum在91%的水平上独自聚在一起。分支Ⅰ供试菌株在96.4%水平上分为4个表观群:群1有23株菌,主要分离自草木樨(Melilotus suaveolens);群2有17株菌,主要分离自细齿草木樨(M. dentatus);群3有6株菌,主要分离自白香草木樨(M. albus);群4包括3株菌,2株菌寄主为细齿草木樨(M. dentatus),1株菌为草木樨(M. suaveolens)。16S rDNA PCR RFLP分析表明,63株供试菌的酶切图谱类型组合只有2种。其中类型Ⅰ包括CCNWSX0003-1、CCNWSX0003-2和CCNWSX0004-1,均来自陕西凤县唐藏镇的草木樨植物;类型Ⅱ包括60株供试根瘤菌,分别来源于陕西、甘肃、宁夏不同地区的草木樨、白香草木樨和细齿草木樨植物。16S rDNA基因全序列分析确定了供试草木樨属根瘤菌代表菌株的系统发育关系,分别位于根瘤菌属(Rhizobium)和中华根瘤菌属(Sinorhizobium)系统发育分支。类型Ⅰ的代表菌株CCNWSX0003-1与豌豆根瘤菌(R. leguminosarum)的模式菌株USDA2370序列相似性达到99.8%,在分类地位上属于Rhizobium分支;类型Ⅱ的代表菌株CCNWGS0006与草木樨中华根瘤菌(S. meliloti)的16S rDNA相似性为100%,属于Sinorhizobium分支。共生基因(nodA和nifH)PCR RFLP及其系统发育学研究表明,所有供试菌株的nodA基因型有3种,代表菌株CCNWGS0006的nodA基因片段与参比菌株S. meliloti相似性达到99%,这与16S rDNA全序列分析结果一致;供试菌株的nifH基因型有5种,依据nifH基因建立的系统发育关系与16S rDNA序列的系统发育关系基本一致,但也存在着差异。