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本论文分两部分。首先,对滇山茶(Camellia reticulata Lindl.)及其近缘种的相关研究和荧光原位杂交技术进行综述。分别从滇山茶的栽培历史,系统位置,分类学现状、地理分布、主要的形态学以及细胞学特征进行了综述,同时对原位杂交的原理,发展历史及其应用进行综述。
其次,叙述了开展此实验的研究背景以及基因组荧光原位杂交的应用。同时利用基因组荧光原位杂交技术对滇山茶(C.reticulata)的六倍体的起源进行研究讨论,并对实验过程中,影响实验成功与否的因素讨论。
本研究利用山茶(Camellia japonica L.)、怒江山茶(Camellia saluenensis Staf ex Beans)、滇山茶(C.reticulata)二倍体的基因组总DNA作探针,以滇山茶(C.reticulata)六倍体减数分裂(n=45,3个基因组)染色体为靶DNA进行荧光原位杂交。根据杂交信号的分布及多少,进行讨论。主要研究结果和结论如下:
怒江山茶(C.saluenensis)作为探针进行杂交,14个二价体完全杂交,21个二价体部分杂交,10个二价体没有杂交信号;滇山茶(C.reticulata)二倍体作为探针进行杂交,15个二价体完全杂交,16个二价体部分杂交,14个二价体没有杂交;山茶(C.japonica)作为探针,3个二价体进行杂交,为同源的染色体,15个二价体部分杂交为异源染色体,27个二价体没有杂交。
根据以上杂交结果:说明滇山茶(C.reticulata)六倍体染色体一个基因组中有14对同源染色体与怒江山茶(C.saluenensis)同源;另外有1个基因组成分与滇山茶(C.reticulata)二倍体同源。证明滇山茶(C.reticulata)二倍体,怒江山茶(C.saluenensis ),是滇山茶(C.reticulata)异源六倍体的亲本。
从三种探针杂交结果看:在滇山茶(C.reticulata)45个二价体中,有32(14+15+3)个同源二价体,还有13对同源染色体没有杂交,这充分说明虽然滇山茶(C.reticulata)六倍体(x=15,n=45)由三个基因组组成,但它的亲本种(或是供体种)不只3种,肯定是3种以上。根据部分杂交结果证明滇山茶(C.reticulata)六倍体的基因组还含有山茶(C.japonica)的基因组成分。
同时进一步推测滇山茶复合多倍体的其他亲本种为西南山茶(Camellia pitardii Coh. Stuat),猴子木(Camellia yunnanensis Cohen Stuart)。