【摘 要】
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目的: 设计并筛选到针对NF-kB/p65(relA)的RNA干扰的最有效靶点。构建重组腺病毒，感染小鼠成肌细胞并表达设计的siRNA，通过RNA干扰(RNA interference，RNAi)作用，沉默NF-kB/p65
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目的:
设计并筛选到针对NF-kB/p65(relA)的RNA干扰的最有效靶点。构建重组腺病毒，感染小鼠成肌细胞并表达设计的siRNA，通过RNA干扰(RNA interference，RNAi)作用，沉默NF-kB/p65基因，抑制NF-kB/p65的表达。探讨对致炎因子生成的影响，为进一步研究实验性类风湿性关节炎提供理论依据。
方法:
根据Ambion公司提供的软件，按照RNAi的设计原则，设计3个NF-kB/p65的干扰靶点，并据设计相应的短发夹结构的RNA(short hairpin RNA，shRNA)合成相应RNA的DNA模板，通过T4连接酶，将这些DNA分别插入shuttle vector 1.0 CMV质粒中形成3种重组质粒。用脂质体法将重组质粒分别转染入小鼠成肌细胞(C2C12)。通过RT-PCR方法比较各mRNA的转录水平，进而筛选出沉默效果最好的表达质粒。用所选出的重组质粒与腺病毒骨架(Adenoviral lacZ Backbone)线性化后共转染293细胞得到重组腺病毒。用重组腺病毒感染C2C12细胞检测其感染的效果。
结论:
设计的shRNA的DNA模板可以插入到shuttle vector 1.0 CMV表达质粒，形成重组质粒，重组质粒可由脂质体法转入C2C12细胞，并能够有效的抑制C2C12的NF-k B/p65的mRNA的表达。
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