复元活血汤对大鼠骨折转化生长因子β1、血清Ⅰ型胶原、骨钙素表达的影响

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hejianfeng05
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目的:建立左股骨中段闭合折骨经皮髓内克氏针固定的标准骨折模型,观察复元活血汤对SD大鼠骨折愈合过程中局部转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1) mRNA、蛋白表达、血清Ⅰ型胶原、骨钙素表达的影响,石蜡切片,X光片,观察骨折愈合情况,通过RT-PCR(反转录-聚合酶链反应),ELISA法(酶联免疫吸附反应法)进行分析转化生长因子β1的表达,探讨复元活血汤对大鼠骨折愈合的影响。方法:选择健康3个月龄雄性大鼠70只。建立闭合性的股骨干折骨髓内固定模型,将66造模成功的随机分为复元活血汤组30只和生理盐水组30只和正常组6只,复元活血汤组和生理盐水组每组又分为骨折后3、5、7、14、21d 5个时相点,每个时相点有6只。大鼠麻醉苏醒后开始每天灌服1g/ml复元活血汤药液2ml,每天两次,生理盐水组相同条件下灌服等体积的生理盐水,分别于3、5、7、14、21d取下骨痂组织,通过RT-PCR(反转录-聚合酶链反应),ELISA法(酶联免疫吸附反应法)进行分析转化生长因子β1mRNA及蛋白表达。腹主动脉取血,检测血清Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;同时取骨折区组织行石蜡切片,HE染色,显微镜下观察。结果:复元活血汤能促进骨折SD大鼠Ⅰ型胶原、骨钙素、TGF-β1mRNA及蛋白的表达。SD只大鼠全部纳入结果分析。SD大鼠血清Ⅰ型胶原3d时开始表达增强,7天表达减弱,达到低谷(高于正常值)。然后表达逐渐增强,21天时达到高蜂,两组的表达趋势一致。而中药组表达量始终较对照组高,血清骨钙素的表达与Ⅰ型胶原的表达基本一致。TGF-β1在骨折愈合的不同阶段基因表达的水平是不同的,其表达在骨折后第3天有一个初期峰值;在第7天会出现一个低谷;而在骨折后第2周,转化生长因子的表达会再次升高,达到第2个峰值,也是最高表达期;其后的表达逐渐降低。骨折后3、7、14、21d复元活血汤组转化生长因子β1mRNA的表达高于生理盐水组。TGF-β1mRNA与蛋白的表达具有一致性。中药组与对照组比较,骨折后7d、14d TGF-β1mRNA增强非常显著(P<0.01),14d蛋白表达增强显著。复元活血汤能刺激骨折SD大鼠能促进骨折的愈合。结论:1.大鼠股骨中段闭合折骨髓内克氏针固定骨折模型稳定,可操作性强,重复性好。2.复元活血汤能促进骨折SD大鼠Ⅰ型胶原、骨钙素、TGF-β1mRNA及蛋白的表达。3.复元活血汤能刺激骨折SD大鼠能促进骨折愈合。4.TGF-β1是骨折愈合过程中软骨内成骨的标志性因子。
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