IGFBP-3在香烟烟雾提取物致肺泡II型上皮细胞损伤中的作用研究

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目的:观察在香烟烟雾提取物(CSE)引起的肺泡上皮细胞损伤中IGFBP-3的表达变化,同时观察萝卜硫素(SFN)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)是否能缓解香烟烟雾提取物造成的损伤。方法:体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN细胞株。分别制备5%,10%,20%浓度的CSE,并处理RLE-6TN细胞株24 h, MTT实验观察不同浓度CSE对RLE-6TN细胞的增殖抑制效果。使用1,5,10,20,40,80和160 μM的SFN处理RLE-6TN细胞24 h, MTT实验观察SFN对细胞的毒性作用。在使用5%CSE处理细胞的同时,分别采用5μM SFN与1 mM NAC处理细胞,MTT实验观察SFN和NAC对细胞的保护作用。流式细胞仪分析CSE处理组、SFN处理组和NAC处理组的细胞周期情况。最后分别使用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和western blot技术从基因和蛋白水平分析各个组别间IGFBP-3及IGFBP-5的表达变化。结果:CSE可以引起RLE-6TN细胞发生显著的增殖抑制,且呈现剂量依赖关系。5 μM SFN和1 mM NAC能在一定程度上减轻CSE造成的增殖抑制。同时5%CSE处理使RLE-6TN细胞发生Go/G1期阻滞,而SFN和NAC处理则可减轻CSE刺激对细胞周期的影响。RT-qPCR分析发现,5%CSE处理可以显著提高RLE-6TN细胞内的IGFBP-3 mRNA水平,而SFN和NAC处可以降低RLE-6TN细胞内的IGFBP-3 mRNA水平。Western blot检测与RT-qPCR结果一致,可见5%CSE处理可以显著提高RLE-6TN细胞内的IGFBP-3蛋白水平,而SFN和NAC处可以降低RLE-6TN细胞内的IGFBP-3蛋白水平。5%CSE处理降低了RLE-6TN细胞内的IGFBP-5 mRNA水平,SFN和NAC处理可提高IGFBP-5 mRNA水平。而IGFBP-5在蛋白水平上的表达在各组之间无明显差异。结论:香烟烟雾提取物可能通过提高IGFBP-3的表达水平来抑制RLE-6TN细胞的增殖并造成周期阻滞,萝卜硫素和N-乙酰半胱氨酸具有对抗香烟烟雾提取物损伤的保护作用。
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