研究背景与目的:成人生长激素缺乏症是由垂体前叶分泌生长激素不足引起的内分泌疾病,常伴有身体成分组成比例改变,脂糖代谢紊乱,导致非酒精性脂肪肝发病率明显高于正常人。我们既往研究表明,生长激素缺乏条件下棕榈酸(PA)可以加重肝细胞的脂质沉积,本研究中,我们探讨生长激素缺乏状态下棕榈酸(PA)增加线粒体氧化应激加重肝细胞凋亡的经典信号通路。方法:构建慢病毒干扰载体下调永生化肝L02细胞生长激素受体(GHR),PCR法检测GHR的mRNA表达水平,构建稳定低表达GHR的肝L02细胞株。用不同浓度PA(75umol,150umol或300umol)处理肝L02细胞12h,24h,48h,检测细胞活力以筛选最适宜处理条件。将实验分为慢病毒GHR敲低组(shRNAGHR)和空载病毒(Vector)组,使用PA(150umol)干预细胞24h。采用油红“O”,BODIPY荧光染色观察生长激素缺乏的L02肝细胞与对照肝细胞内脂质沉积情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;JC-1检测L02肝细胞内线粒体膜电位的变化;DHE荧光探针检测细胞ROS水平以及MitoSox荧光探针检测线粒体ROS水平,western blot检测经典线粒体凋亡通路相关蛋白;免疫荧光观察mitotracker与bax的共定位表达;用靶向线粒体抗氧化剂MitoTEMPO预处理肝L02细胞,观察是否能够改变生长激素缺乏状态下PA诱导的ROS水平变化及凋亡情况。结果:CCK-8结果提示PA对L02细胞存活率的抑制呈浓度依赖性,用150umolPA处理细胞12h,24h,48h后发现,GHR敲低组细胞内ROS水平以及线粒体内ROS水平产生显著高于Vector组,凋亡细胞数目显著高于Vector组。油红“O”染色,BODIPY荧光均证实GHR敲低组细胞更易发生脂质聚集。GHR敲低组在PA的刺激下,线粒体凋亡通路相关蛋白细胞色素c,Cleaved Caspase 9,Cleaved Caspase3,PARP蛋白水平显著高于Vector组。肝L02细胞免疫荧光同时验证GHR敲低组在PA的刺激下,Bax蛋白更多由胞质易位到线粒体。采用靶向线粒体抗氧化剂mitoTEMPO预处理细胞后,GHR敲低组肝L02细胞凋亡有明显改善。结论:(1)成功构建生长激素受体缺乏的肝细胞模型(2)生长激素缺乏状态下会加重肝细胞脂质沉积和肝细胞凋亡,PA通过线粒体/ROS途径发挥重要作用。