【摘 要】
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长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)是一种由RNA聚合酶Ⅱ指导转录形成的一类长度大于200bp而小于100kb的RNA分子。转录组测序发现的长链非编码RNA Lnc247为Foxk1的天然反义LncRNA。Foxk1基因在调控骨骼肌卫星细胞的增殖分化方面具有重要作用,因此,研究Lnc247的功能可为揭示lncRNA在骨骼肌损伤修复中的调控作用提供依据。本论文采用分
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长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)是一种由RNA聚合酶Ⅱ指导转录形成的一类长度大于200bp而小于100kb的RNA分子。转录组测序发现的长链非编码RNA Lnc247为Foxk1的天然反义LncRNA。Foxk1基因在调控骨骼肌卫星细胞的增殖分化方面具有重要作用,因此,研究Lnc247的功能可为揭示lncRNA在骨骼肌损伤修复中的调控作用提供依据。本论文采用分子生物学、组织化学、转录组和生物信息学分析等多种研究手段,围绕Lnc247对骨骼肌再生过程中重要的转录调控因子Foxk1的作用及对骨骼肌损伤修复的影响进行了研究。1.用高性能的可视化工具——整合基因组浏览器(Integrative Genomics Viewer IGV)和UCSC的BLAT功能分析发现Lnc247与Foxk1的部分3′UTR区域反向互补,表明Lnc247为Foxk1的天然反义lncRNA。2.采用腺病毒相关病毒(AAV)在胫骨前肌中过表达Lnc247,Western Blot结果显示,Foxk1的蛋白水平显著低于对照组,表明过表达Lnc247对Foxk1基因的表达具有负调控作用。3.Western Blot和qPCR结果显示,在骨骼肌损伤模型中,Lnc247过表达组的肌源性分化转录因子MyoD的蛋白表达量和e-MHC的表达量显著高于对照组,表明Lnc247的表达能够促进受损肌纤维的肌源性分化,加快骨骼肌损伤修复的过程。4.采用H&E染色观察骨骼肌的损伤修复情况,结果表明,在骨骼肌损伤模型中,Lnc247过表达组具有中央核的再生肌纤维横截面积比对照组大。5.采用转录组和生物信息学分析,对Lnc247过表达损伤组和对照损伤组差异表达基因进行GO基因功能富集分析和KEGG通路分析,发现显著富集的GO term有肌肉组织的发生,能量的代谢,蛋白质等生物大分子的合成与代谢,显著富集的KEGG pathway有柠檬酸循环及氨基酸生物合成,说明骨骼肌在损伤后需要更多的能量和物质的合成来修复受损的肌纤维。
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