论文部分内容阅读
高血压是多种心、脑血管疾病的重要病因和危险因素。目前用来降压的药物都有副作用,因此,人们一直在寻找更安全的降压药。菜籽为我国的主要油料作物之一,而菜籽粕被广泛的当做饲料,脱脂菜籽饼粕含有30%-40%的优质蛋白,是一种潜在的、理想的优质蛋白资源,适合作为制备ACE抑制肽的原料。建立了测定菜籽蛋白ACE抑制肽体外活性检测的RP-HPLC法,确定了预处理过程中反应时间需50min且需经乙酸乙酯处理,并经过了Captopril验证。以菜籽蛋白为原料,比较了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶及菠萝蛋白酶对其的酶解效果,结果证明使用碱性蛋白酶酶解效果最好,其水解度和ACE抑制活性达到最高,分别为14.25%和53.30%。后以碱性蛋白酶为水解用酶,进行单因素试验,得到最优条件为底物浓度为4%,时间为5h,温度为50℃,酶用量为6Au/g,pH为9。在此基础上,研究了超声波辅助酶解,利用响应面对超声波辅助水解工艺进了优化,得到最佳试验条件：超声波处理时间23min、超声波功率203W、超声波水浴温度46℃。研究用10kDa超滤膜对水解液进行超滤以除去大分子蛋白质,试验结果表明：当待过滤液浓度在12g/L,膜压差在200K Pa左右时,超滤效果较好。收集滤液,进行层析分离,对洗脱液进行了选择,表明水是适合的洗脱液。经凝胶过滤后得到的3#其ACE抑制活性最高。通过对流动相的梯度洗脱条件进行摸索,3#峰组分经反相高效液相进行进一步纯化分离,得到了更纯活性更高的c#峰组分。其纯度达95%以上,且IC50为0.0118mg/mL。对其稳定性研究表明,菜籽ACE抑制肽对ACE的抑制效果随温度升高及时间延长而降低。另外,与肠道酶作用结果表明,菜籽蛋白水解液经消化前后其活性几乎不变,并经HPLC试验得到几乎相同的肽谱,说明其具有较好的消化道酶类耐受性。