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干扰素调节因子3(IRF3)和干扰素调节因子7(IRF7)是干扰素转录因子家族的成员,是抗病毒感染天然免疫应答的关键分子,主要参与炎症反应和免疫反应,诱导I型干扰素的产生。为了研究IRF3和IRF7在表达调控中的作用,本研究检测了IRF3和IRF7在犊牛组织中的分布情况,结果表明IRF3在犊牛脾脏中含量最高,在肝脏中含量最少,IRF7属于诱导型表达,在各个组织中的含量都很低。随后对IRF3和IRF7进行了克隆和表达,并制备了高效价的多克隆抗体,为后续实验提供了物质材料。为了探索IRF3和IRF7的转录调控机制,本实验以牛肝基因组为模板分别克隆了IRF3和IRF7启动子,并分别构建了IRF3和IRF7启动子双荧光素酶报告基因载体,利用双荧光素酶基因报告系统检测IRF3和IRF7启动子的活性,随后构建了包含IRF3和IRF7启动子一系列5’侧翼区不同长度截短片段的双荧光素酶报告基因载体,结果表明IRF3基因上游-1511到-1012bp存在转录因子结合的正调控区域,-12至+40bp存在转录因子结合的负调控区域;IRF7基因上游-550到-311bp存在转录因子结合的正调控区域。生物信息学软件预测发现在IRF7基因上游-550到-311bp之间存在转录因子SP1和STAT1的结合位点。为了进一步探索转录因子SP1和STAT1对IRF7的影响,本研究克隆了转录因子SP1和STAT1,并构建了真核表达载体pCMV-HA-SP1和pCMV-HA-STAT1,与IRF7启动子共转染细胞,结果表明SP1和STAT1可增强IRF7启动子的活性,过表达SP1和STAT1能增强IRF7的蛋白表达水平。随后利用RNA干扰实验,构建了SP1和STAT1的干扰RNA pSH-SP1和pSH-STAT1,发现转染干扰RNA pSH-SP1和pSH-STAT1后可降低IRF7的启动子活性,同时也会抑制IRF7的蛋白表达水平。本研究证明了IRF3基因上游的-1511到-1012bp存在转录因子结合的正调控区域,-12至+40bp存在转录因子结合的负调控区域;IRF7基因上游的-550到-311bp之间存在转录因子结合的正调控区域,转录因子SP1和STAT1在IRF7核心启动子调控方面具有关键性的正调控作用。以上结果为IRF3和IRF7在天然免疫转录调控深入研究奠定了基础。