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传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病,以严重免疫抑制和青年鸡死亡率高为主要特征,对世界养禽业带来严重的损失。病毒感染的第一步是病毒与靶细胞受体的结合,因此研究IBDV受体对揭示病毒-细胞相互作用非常关键。热应激蛋白90α(Heat shock protein 90a,Hsp90a)是细胞适应株IBDV感染鸡成纤维细胞的受体之一或受体复合物成分,但在野毒株IBDV感染鸡法氏囊细胞中的作用尚不清楚。类弹性蛋白多肽(Elastin-like polypeptide, ELP)具有温度敏感可逆相变特性,在低于其相变温度的溶液中呈溶解状态,高于相变温度的溶液中呈凝聚状态,因此可用简单的离心法进行其融合蛋白的分离纯化。本课题组将ELP的相变特性与病毒受体结合特异性相结合,建立的病毒受体结合捕捉技术可用于腺病毒的浓缩、纯化和监测。本研究利用相同原理,将鸡Hsp90a及其cDNA片段与ELP进行融合表达,旨在探明Hsp90a的IBDV结合区,并为建立IBDV浓缩与纯化方法奠定基础。为了初步确定Hsp90a的IBDV结合区,用RT-PCR从鸡胚成纤维细胞扩增Hsp90a全长cDNA及其N端284个氨基酸编码序列和C端444个氨基酸编码序列,分别插入含ELP编码序列的原核表达载体pET-ELP;分别将重组质粒pET-ELP-Hsp90α、pET-ELP-N284和pET-ELP-C444转化BLR (DE3)大肠杆菌,在20℃用IPTG诱导重组蛋白表达,在优化条件下用ELP的温度敏感逆向相变循环(ITC)纯化融合蛋白；将纯化的融合蛋白与IBDV孵育结合,用RT-PCR检测病毒是否与重组Hsp90a及其片段结合。结果显示：ELP与Hsp90a及其片段融合蛋白均为可溶性表达；ELP-Hsp90a和ELP-C444融合蛋白能与IBDV结合,而ELP-N284融合蛋白不能与IBDV结合,表明Hsp90a的IBDV结合区位于C端444个氨基酸区域。为了探明Hsp90a是否参与野毒株IBDV感染鸡法氏囊细胞,从SPF鸡胚分离培养法氏囊细胞,分别用RT-PCR和间接免疫荧光试验检测Hsp90a表达,以法氏囊细胞系DT40细胞和成纤维细胞系DF-1细胞为对照,结果显示法氏囊细胞系及原代细胞均表达Hsp90a分子；分别用重组Hsp90a孵育IBDV和Hsp90a抗体孵育法氏囊细胞,间接免疫荧光试验和病毒滴定检测结果显示重组Hsp90a及其抗体对IBDV感染法氏囊细胞均有部分阻断作用,其中Hsp90a抗体的阻断作用较强,与鸡sIgM抗体的阻断作用接近,提示Hsp90a参与强毒株IBDV感染法氏囊细胞,但与sIgM一样,不是IBDV感染法氏囊细胞的唯一受体。