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斑马鱼具有其它模式动物不具备的优点,如繁殖周期短、胚胎透明、发育速度快等,且其基因组与人类具有较高的同源性。因此,斑马鱼(Danio rerio)已成为研究脊椎动物胚胎发育过程的理想模型,并可用于人类疾病遗传和发生发展机理的研究。为寻找和发现参与早期胚胎发育的新基因,本研究利用Tol2转座子介导的基因捕获技术筛选带有荧光的突变体,通过对突变体的研究,以期揭示相关基因在斑马鱼发育过程中的作用机理。 本研究共获得了3个突变体品系,找到了Tol2转座子捕获到的基因,并选择其中的cldn7b突变体品系进行了详细的研究。在cldn7b突变体中,Tol2转座子插入到10号染色体上cldn7b基因的第一个内含子中,导致该基因转录表达水平的大幅度下降。 在Cldn7b突变体品系中,claudin7b与红色荧光的融合蛋白在内耳、侧线、前肾管、嗅窝等器官中特异性表达,纯合子突变体表现出内耳耳腔膨大、耳石积累缓慢、半规管发育迟缓等。对斑马鱼幼苗进行听力检测,发现纯合子突变体表现出对声音刺激的不敏感性。在纯合子胚胎中,注射cldn7b基因的capped mRNA可以明显地拯救内耳的缺陷表型,说明该缺陷表型确实是cldb7b基因被破坏造成的。整体原位杂交研究发现,该基因的破坏不影响内耳发育图式的形成,也不影响内耳毛细胞和神经细胞的发育形成。电镜切片清晰展示,与对照比较纯合子突变体内耳上皮细胞紧密连接长度明显变短。Claudin7b和其它Claudin蛋白家族成员是形成紧密连接复合体的重要结构组成,而紧密连接复合体的完整性是保持内耳耳腔淋巴液稳态的必要条件。斑马鱼内耳充满淋巴液,其稳态是斑马鱼内耳行驶正常功能必要的。因此,本研究揭示了Claudin7b在紧密连接形成和内耳功能中的重要作用,获得的Cldn7b突变体为研究紧密连接形成和相关听力缺陷的机制提供了很好的动物模型。