目的：本研究旨在通过分子生物学技术明确miRNA-23b/27b/24-1基因簇对gremlin1和LOX的直接靶向作用；在大鼠肝星状细胞（HSC-T6）中，过表达该基因簇后，确认其协同效应比单个microRNA，能更有效地下调肝纤维化相关基因的表达；慢病毒颗粒感染原代大鼠的肝星状细胞（HSCs），实现miRNA-23b/27b/24-1基因簇的高表达后，确认其对肝纤维化相关基因的表达下调作用，验证其对肝星状细胞活化的抑制效果。　　方法：　　(1)分别构建大鼠gremlin1基因的3′非编码区（3′UTR）及其突变体的荧光素酶报告质粒pMIR-Luc-G3、pMIR-Luc-G3-mutant23b和pMIR-Luc-G3-mutant27b，将其分别与miR-23b或miR-27b的类似物(mimic)共转染HSC-T6，验证其对gremlin1的直接靶向作用。　　(2)分别构建大鼠LOX基因的3′UTR及其突变体的荧光素酶报告质粒pMIR-Luc-LOX-3′UTR、pMIR-Luc-LOX-3′UTR-mutant27b、pMIR-Luc-LOX-3′UTR-mutant24-1，将其分别与miR-27b或miR-24-1类似物共转染HSC-T6，验证其对LOX的直接靶向作用。　　(3)分别构建pCDH-miR-23b、pCDH-miR-27b、pCDH-miR-24-1及pCDH-miR-23b/27b/24-1慢病毒表达质粒，将其分别或共转染至HSC-T6中，Real time PCR检测HSC-T6中各microRNA的表达，RT-PCR和Western Blotting分别从mRNA水平和蛋白水平，检测HSC-T6中TGF-β1等肝纤维化相关分子的表达量变化。　　(4)分离提取原代大鼠肝星状细胞(HSCs），用TGF-β1刺激使其活化，将构建的pCDH-miR-23b/27b/24-1慢病毒表达质粒转染至活化的HSCs中，Real time PCR检测HSCs中各microRNA的表达， Western Blotting从蛋白水平检测HSCs中COLIα2的表达。　　结果：　　(1)成功构建了pMIR-Luc-G3、pMIR-Luc-G3-mutant23b和pMIR-Luc-G3-mutant27b荧光素酶的报告质粒，验证了miR-23b、miR-27b mimic对gremlin1-3′UTR具有直接的靶向作用。　　(2)成功构建pMIR-Luc-LOX-3′UTR、pMIR-Luc-LOX-3′UTR-mutant27b、pMIR-Luc-LOX-3′UTR-mutant24-1荧光素酶的报告质粒，验证了miR-27b、miR-24-1 mimic对LOX-3′UTR具有直接的靶向作用。　　(3)成功构建了pCDH-miR-23b、pCDH-miR-27b、pCDH-miR-24-1、pCDH-miR-23b/27b/24-1慢病毒表达质粒，在HSC-T6中，通过Western Blotting证实miR-23b/27b/24-1基因簇较单个microRNA，更能有效地下调COLIα1、COLIα2和TGF-β1等肝纤维化相关基因的表达；通过Western Blotting从蛋白水平，进一步确认该基因簇能有效地沉默gremlin1和LOX，也能有效地下调COLIα1、COLIα2和TGF-β1的表达，不能下调MMP2、MMP9和TIMP1的表达。　　(4)成功分离提取原代HSCs后，通过Western Blotting验证了miR-23b/27b/24-1基因簇能有效下调COLIα2的表达。　　结论：miR-23b和miR-27b能直接靶向沉默gremlin1；miR-27b和miR-24-1能直接靶向沉默LOX；miRNA-23b/27b/24-1基因簇较单个microRNA，更有效地下调HSC-T6中COLIα1、COLIα2和TGF-β1等肝纤维化相关基因表达；miRNA-23b/27b/24-1基因簇能有效地下调原代HSCs中COLIα2的表达。