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Micro RNAs包括了mi RN As和si RN As,是一类由21-24个碱基构成的具有保守结构域的非编码RNA。Micro RNAs在动植物中广泛存在且对其生长和发育具有重要的调控作用。Micro RNAs主要是通过靶定下游的相关基因,影响其转录后水平的表达来调控植物体的一系列生长发育过程。mi R156是一种古老的Micro RNAs,在植物体中mi R156具有高度保守的结构域。大量研究表明,mi R156通过靶定SQUAMOSA–promoter binding-like(SPL)转录因子在植物的阶段发育和成花转变时期起到重要的调控作用。本实验室前期通过转录组测序得到了枳属中mi R156的三个前体序列,分别是Ptmi R156a、Ptmi R156b和Ptmi R156c。本研究分离了柑橘不同种属的3个mi R156家族基因,并进行了序列分析。同时,采用STTM的方法构建了三个基因的干涉载体,转化普通枳和伏令夏橙愈伤,初步探究其在柑橘阶段发育和成花转变中所起的作用。得到结果如下:1.在甜橙、普通枳和早实枳中分别克隆mi R156家族基因,通过测序比对分析,其核心序列没有变化,而侧翼序列仅有个别碱基变化;通过对拟南芥、水稻和甜橙中mi R156家族基因的克隆分析可知,在不同物种间,mi R156的核心序列同源性很高而侧翼序列差别较大。这一结果表明:mi R156家族基因在物种间的广泛存在且高度保守。2.分别提取普通枳和早实枳不同年龄时期叶片以及成熟花器官的RNA,通过Real-time PC R检测了mi R156家族基因在营养阶段和成花转变时期的表达量变化。结果表明:mi R156家族基因在幼嫩叶片中表达很高,随着叶龄的增加而逐渐减少;而在成熟花器官的各部位中表达差异较大,表明mi R156参与了年龄途径和成花转变,并在其中起到重要的调控作用。3.采用了Short Tandem Target Mimic(STTM)的方法成功构建了35S::Ptmi R156a、156b、156c的干涉载体,转化普通枳和伏令夏橙愈伤,初步探究mi R156家族基因的作用。