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天然产物单体一直以来都是药物以及药物先导化合物的重要来源,具有化学结构复杂、生物活性多样的特点。传统的化学药物不仅具有较多副作用和易产生抗药性,还容易引发各种药源性疾病,因此对天然产物的开发尤为重要。橙皮素(Hesperetin)是一类天然黄酮类化合物,为橙皮苷水解后失去一分子芸香糖而得到的苷元,属黄烷酮类化合物。橙皮苷和橙皮素主要来源于芸香科柑橘属果实的果皮,是其主要的药效活性成分之一,同时还存在于多种水果、蔬菜、茶和豆类中。据报道,橙皮素具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、调节免疫系统、防辐射、抗菌抗病毒、保护心血管系统等生物活性。虽然其药理活性广泛,但是水溶性及脂溶性均较差,在体内又很容易被迅速代谢,难以维持较高的血药浓度,如此低生物利用度的问题限制了临床应用。实验证明,化合物结构很大程度上影响了化合物的生物活性,因此本实验室前期合成改进了一系列的橙皮素衍生物,并且已证明这些衍生物具有比橙皮素更好的抗炎效果。其中5,7,3’-三乙酰橙皮素通过调控JAK2/STAT3通路抑制佐剂性关节炎(AA)大鼠的炎症反应;7,3’-二甲氧基橙皮素通过诱导AA大鼠的滑膜细胞凋亡起到抑制炎症的作用;橙皮素衍生物7通过调控Wnt/β-catenin通路来抑制PDGF诱导的肝星状细胞活化和增殖起到抗纤维化作用;橙皮素衍生物11可以调控PTEN/AKT通路抑制肝星状细胞活化与增殖。上述结果提示,我们获得橙皮素衍生物具有成为抗炎免疫药物先导化合物的条件。为了开发新的药物资源,充分发挥橙皮素的功能和挖掘其更深的价值,课题组继续对橙皮素进行结构修饰,以寻找活性更高的橙皮素衍生物。本论文具体研究工作如下:1、橙皮素-7-醚类衍生物:橙皮素7位羟基的改变能使其立体结构改变,从而影响和药物活性。以橙皮素为原料,通过与溴化物反应在7位形成醚,合成一系列衍生物共16个,并通过活性检测结果进行构效关系分析。2、抗炎活性筛选:选取小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞株对橙皮素-7-醚类衍生物进行抗炎活性筛选,设置正常组、LPS刺激组及给药组,进行NO、IL-1β和IL-6含量检测,发现化合物1f,1h,1i,1l和1k可以明显抑制NO的产生。化合物1d,1h,1k,1l,2a,2b和2c可以减少IL-1β和IL-6的分泌,具有比橙皮素更明显的抗炎活性。3、相关蛋白表达:使用活性最为显著的化合物1l进行蛋白表达研究,发现其对i NOS、NF-κB信号通路相关蛋白有影响。4、化合物1l体内抗炎作用:使用CCl4致小鼠急性肝损伤模型检验化合物1l的抗炎活性,设置低、中、高剂量组,通过对比对照组、水飞蓟素组及模型组,发现化合物1l能减轻小鼠肝损伤及减少炎症因子的分泌。