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目的：靶向Survivin基因的微小]RNA(microRNA,miRNA)真核表达载体的构建以及探讨其对人结肠癌(HT-29)细胞增殖、凋亡的影响。方法：(1)设计合成4对针对Survivin基因不同位点的miRNA序列,利用转化技术将目的片段定向克隆至pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR真核表达载体上,构建靶向survivin基因的miRNA重组质粒并进行测序鉴定。(2)HT-29细胞接种于6孔板,空质粒与四组重组质粒瞬时转染进入细胞中,48小时后荧光倒置显微镜观测各组细胞荧光情况,应用流式细胞仪检测细胞转然后的转染效率,选择转染效率最高的组为目的基因组。(3)将目的基因组以及空质粒组菌株复苏,LB培养基培养,利用碱变性法提取得到相应质粒DNA,并对所提取的质粒进行浓度以及纯度的测定。(4)继续接种细胞并将细胞分为空白对照组、转染试剂组、空质粒组(阴性对照组,negtive control,NC)以及目的基因组(阳性对照组,positive control,PC)四组。瞬时转染48小时后收集各组细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞的增殖指数(proliferation index,PI)以及凋亡率(apoptosis rate,AR),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组Survivin mRNA的表达量,转染72小时后,收集各组细胞利用免疫印迹法(Western blot)检测靶基因：Survivin蛋白的表达情况。结果：(1)对构建的4组pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR真核表达载体载体进行测序,结果显示载体构建成功。(2)HT-29细胞转染后,目的基因组细胞增殖指数与其他各组相比有明显降低(t=20.05, P<0.01;t=18.75, P<0.01;t=18.59, P<0.01),凋亡率明显增高(t=16.40, P<0.01;t=15.84, P<0.01;t=15.92, P<0.01),正常组、空质粒组以及转染试剂组两两比较未见明显差异(P>0.05)；靶基因的survivin mRNA表达明显降低(t=0.68, P<0.01;t=0.58, P<0.01;t=0.61, P<0.01),蛋白的表达亦明显降低(t=0.64, P<0.01; t=0.62, P<0.01;t=0.67, P<0.01),正常组、空质粒组以及转染试剂组两两比较亦未见明显差异(P＞0.05)。结论：(1)成功构建靶向Survivin基因的真核表达载体pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR。(2)将质粒转染入HT-29细胞后,可以沉默HT-29细胞Survivin基因的表达,明显促进结肠癌细胞的凋亡,并能够抑制结肠癌细胞的增殖。