【摘 要】
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首先利用脂质体将构建好的携hGH基因的乳腺特异性表达载体pLNCX-βLG-hGH转染小鼠胚成纤维细胞,转染3天后,G418筛选8天,挑取阳性克隆移入24孔板培养,长满后移入培养瓶中.进行
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首先利用脂质体将构建好的携hGH基因的乳腺特异性表达载体pLNCX-βLG-hGH转染小鼠胚成纤维细胞,转染3天后,G418筛选8天,挑取阳性克隆移入24孔板培养,长满后移入培养瓶中.进行细胞染色体DNA的提取与鉴定,证实已转入hGH基因.取此细胞与5-10倍的人乳腺癌敏感细胞株MCF-7/S在50﹪PEG作用下融合,融合后培养1-2天,放射免疫分析方法检测转hGH基因细胞的暂态表达情况,测杂种细胞培养液中hGH水平.结论：经统计,杂种细胞培养液中hGH水平明显高于各对照组（p<0.05）.这一检测乳腺特异性表达载体在转基因细胞水平的暂态表达方法,简便易行,并暂时避开了一系列有待解决的理论问题,可筛选出在转基因细胞水平上表达量较高的细胞克隆.今后应进一步选取表达量高的转hGH基因胚成纤维细胞克隆作为核移植的核供体,检测F1代动物的乳汁中hGH分泌量.通过实际操作进一步验证这一暂态表达方法的可行性.
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