【摘 要】
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目的:构建含有乙型肝炎病毒S基因和多聚组氨酸尾基因的表达载体,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)S融合蛋白,替代血源HBsAg,用以制备乙型肝炎表
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目的:构建含有乙型肝炎病毒S基因和多聚组氨酸尾基因的表达载体,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)S融合蛋白,替代血源HBsAg,用以制备乙型肝炎表面抗体(HBsAb)ELISA酶免试剂盒.方法:采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列(adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因,亚克隆到PGEM-T载体中,经DNA序列分析后将目的基因定向克隆到酵母表达载体pPICZB,构建重组质粒pPICZB-sAg.SacI消化重组质粒,然后用电转法将线性化的携带有S基因片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H,筛选His Muts表型转化子,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白.表达产物经硫酸胺盐析、镍螯树脂亲和层析纯化后,包被聚丙乙烯反应板,与辣根过氧化物酶标记血源HBsAg配对,用酶联免疫吸附实验(ELISA)双抗原夹心法检测HBsAb.结论:成功构建了pPICZB-sAg重组质粒,在毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,作为包被抗原用于HBsAb的检测,灵敏度、特异性、线性、精密度等检测指标均能满足卫生部临床检验中心质控要求;在随机标本的检测中,检测结果与血源原材料的试剂结果相符,为进一步研制HBsAh诊断试剂盒奠定了基础.
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