【摘 要】
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H5亚型禽流感病毒重组体较多,但流行于我国南方家禽中主要以H5N6亚型为主。2013年,H5N6亚型高致病性禽流感病毒在老挝首次出现,随后在我国野生和家养水禽中逐渐开始流行。截止至2019年2月,我国共发生30起H5N6亚型高致病性禽流感疫情,扑杀约66万只鸡。2014年5月,我国四川省报道了第一例人感染H5N6禽流感病毒的病例。截止至2019年2月,我国有23人感染H5N6禽流感病毒。因此,该病
【基金项目】
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国家重点研发计划项目“动物流感病毒遗传变异与致病机理研究”课题“动物流感病毒免疫学研究”（项目编号:2016YFD0500207）； 广州市科技计划项目（项目编号:201904010022）； 国家自然科学基金面上项目（项目编号:31872497）； 国家自然科学基金联合基金项目（项目
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H5亚型禽流感病毒重组体较多,但流行于我国南方家禽中主要以H5N6亚型为主。2013年,H5N6亚型高致病性禽流感病毒在老挝首次出现,随后在我国野生和家养水禽中逐渐开始流行。截止至2019年2月,我国共发生30起H5N6亚型高致病性禽流感疫情,扑杀约66万只鸡。2014年5月,我国四川省报道了第一例人感染H5N6禽流感病毒的病例。截止至2019年2月,我国有23人感染H5N6禽流感病毒。因此,该病毒不仅对养殖业产业造成了巨大的经济损失,而且对人类的公共卫生健康构成了严重的威胁。本文研究了20172018年广东省部分地区分离的20株H5N6亚型禽流感病毒分子生物学特征和遗传演化特点,也分析了这些毒株对SPF鸡的致病性与传播能力。本研究中的20株H5N6亚型禽流感病毒HA蛋白裂解位点处氨基酸序列为KERRRKR↓G或RERRRKR↓G,符合H5亚型高致病性禽流感病毒的分子特征。其NA蛋白颈部第5868位氨基酸均出现了缺失,但神经氨酸酶耐药性位点均未出现突变。PB2蛋白氨基酸第627位均为E,701位均为D,属于典型禽源禽流感病毒的分子特征。PB1、PA、NP以及NS蛋白的部分致病性相关位点氨基酸发生了突变。Q32毒株M2蛋白的第31位氨基酸出现了与金刚烷胺耐药性相关的突变（S31N）。本研究中20株H5N6亚型禽流感病毒主要位于CN.JP.VN-like、Eurasian lineage、VN 2014-like三个不同进化分支。这些毒株属于不同的基因型,发生了不同基因型间的重组,进而呈现遗传的多样性。本研究中20株H5N6亚型禽流感病毒均位于Clade 2.3.4.4进化分支,其中Q10等7株毒与Re-8疫苗株相比,HA蛋白抗原区出现23个氨基酸的突变;Q35等13株毒与Re-8疫苗株相比,HA蛋白抗原区出现47个氨基酸的突变。因此,本研究中毒株与Re-8疫苗株抗原区的氨基酸位点存在差异。为了研究H5N6亚型禽流感病毒对鸡致病性以及在鸡群中水平传播的能力,将Q80等8株H5N6亚型禽流感病毒以0.1 m L 104EID50/0.1 m L剂量滴鼻点眼感染SPF鸡,将感染鸡只设置为感染组,同时将PBS感染鸡只设置为同居组。实验结果显示,除Q80毒株外,Q95等7株病毒感染组致死率为100%。S23等6株毒株于感染后第2天在各个器官的复制滴度为5.259.75 Log10EID50/0.1 m L;但Q80和Q181毒株于感染后第2天在各个器官的复制滴度为4.506.92 Log10EID50/0.1 m L。除毒株Q95同居组鸡只死亡率为60%外,其余7株病毒同居组死亡率均为100%。Q135毒株同居组鸡于感染后第3天能从口咽和泄殖腔拭子检测到病毒,其病毒滴度分别为4.75Log10EID50/0.1 m L和4.50 Log10EID50/0.1 m L。Q105等7株毒同居组鸡感染后第3天的口咽和泄殖腔拭子病毒滴度分别低于2.60 Log10EID50/0.1 m L和2.90 Log10EID50/0.1m L。因此,20172018年我国广东省部分地区分离的8株H5N6亚型禽流感病毒对鸡都呈现高致病性和在鸡群中均具有较强水平传播能力,但它们致病性和在鸡群中水平传播能力均存在差异。
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