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猪圆环病毒病的主要病原是猪圆环病毒2型。此病是—种重要的免疫抑制疾病，极易引起继发感染与综合感染，且5至13周龄猪最容易感染，感染后表现有消瘦，呼吸急促，黄疸，体质下降，血亏和泻肚等症状，对养猪业造成了巨大的经济损失。近年来，我国PCV2感染率亦呈逐年上升趋势，该病已成为危害我国养猪业的重要免疫抑制性疾病之一，然而，本病尚无特效药物及疫苗广泛推广使用，—方面是因为PCV2基因组小只有1.7kb，同时编码蛋白数量较少，所以限制了针对病毒的药物研发;另—方面，该病毒生长较为缓慢，在体外培养时病毒滴度较低，难以大规模生产疫苗。但疫苗免疫仍是该病的主要防治手段，我国已取得文号生产的PCV2疫苗目前有DBN-SH07毒株，LG毒株和SH毒株制成的灭活疫苗，但是这些疫苗效价普遍偏低。因此，急需建立—种高效价病毒的大规模培养方法，而激流式生物反应器就是—个理想的选择，其具有生产规模大、病毒产量高且稳定和生产成本相对较低等优势。本研究通过初步探究PK-15细胞的最佳培养条件;PCV2-ZJ/C株在PK-15细胞上的最佳增殖条件以及PCV2在激流灌注生物反应器中的最佳增值条件，以期为PCV2疫苗的生产提供—定的理论依据。获得研究结果如下:
1.为了最终能够获得状态良好且适合病毒大规模增殖的PK-15细胞。本研究通过比较不同的培养基类型、消化液浓度、细胞接种密度和细胞复苏方法与PK-15细胞生长状态的关系，研究细胞培养过程中不同的培养条件或环境因素对PK-15细胞生长曲线变化的影响。实验结果显示，最佳的PK-15细胞培养方法包括:用换液法复苏PK-15细胞，以0.05％胰蛋白酶:0.02％EDTA混合液消化细胞，接种密度为2×105cells/mL～2.5×105cells/mL，将DMEM-LG做为培养基培养细胞。
2.为了在PK-15细胞上获得更高滴度的PCV2-ZJ/C株，本实验优化了细胞接种密度、接毒剂量、接毒方法、冻融次数和收获时间等条件。结果表明，接种密度在2.5×105个/mL，同步接毒并加D-氨基葡萄糖进行处理，接毒剂量为2％，接毒后90h收获，-20℃冻融2次，可以获得高滴度PCV2-ZJ/C株。
3.为确定应用AP10激流式生物反应器大规模增殖PCV2-ZJ/C的最佳条件，本研究对反应器培养方法的接种时间、接毒量和收毒时间进行了探索。结果表明，PCV2-ZJ/C最佳接种时间为PK-15细胞规模培养120h，最佳接毒量MOI为0.8，最佳收毒时间为28h。用以上方法最终获得的病毒效价超过107.5TCID50/mL。
本研究采用激流生物反应器以及纸片载体进行PK-15细胞大规模培养，而后成功地用来增殖PCV2-ZJ/C株，获得了107.5TCID50/mL高滴度病毒，本研究为PCV2疫苗的开发及大规模生产打下了坚实的基础。
1.为了最终能够获得状态良好且适合病毒大规模增殖的PK-15细胞。本研究通过比较不同的培养基类型、消化液浓度、细胞接种密度和细胞复苏方法与PK-15细胞生长状态的关系，研究细胞培养过程中不同的培养条件或环境因素对PK-15细胞生长曲线变化的影响。实验结果显示，最佳的PK-15细胞培养方法包括:用换液法复苏PK-15细胞，以0.05％胰蛋白酶:0.02％EDTA混合液消化细胞，接种密度为2×105cells/mL～2.5×105cells/mL，将DMEM-LG做为培养基培养细胞。
2.为了在PK-15细胞上获得更高滴度的PCV2-ZJ/C株，本实验优化了细胞接种密度、接毒剂量、接毒方法、冻融次数和收获时间等条件。结果表明，接种密度在2.5×105个/mL，同步接毒并加D-氨基葡萄糖进行处理，接毒剂量为2％，接毒后90h收获，-20℃冻融2次，可以获得高滴度PCV2-ZJ/C株。
3.为确定应用AP10激流式生物反应器大规模增殖PCV2-ZJ/C的最佳条件，本研究对反应器培养方法的接种时间、接毒量和收毒时间进行了探索。结果表明，PCV2-ZJ/C最佳接种时间为PK-15细胞规模培养120h，最佳接毒量MOI为0.8，最佳收毒时间为28h。用以上方法最终获得的病毒效价超过107.5TCID50/mL。
本研究采用激流生物反应器以及纸片载体进行PK-15细胞大规模培养，而后成功地用来增殖PCV2-ZJ/C株，获得了107.5TCID50/mL高滴度病毒，本研究为PCV2疫苗的开发及大规模生产打下了坚实的基础。