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西瓜(Citrullus lanatus Mansfeld; Watermelon)杂种优势明显,目前我国西瓜生产均使用杂交种。利用雄性不育系进行西瓜杂交种生产,可以大大节省人力物力,有效降低成本。研究西瓜核雄性不育的分子机理,获得相关分子标记和基因片段,能够为不育株早期鉴别和培育优良不育系提供理论和实践基础。AFLP(扩增片段长度多态性)是一种高效、快捷、稳定、可靠的DNA分子标记技术,在分子标记辅助育种上得到广泛应用。本试验旨在构建适合于西瓜的AFLP分子标记反应体系,并利用AFLP分子标记对G17AB雄性不育两用系进行研究以期获得与育性基因紧密连锁的分子标记,为不育株早期鉴别提供快速简便的方法,主要研究结果如下:1.确定了适于AFLP分析的西瓜基因组DNA的提取方法(改良CTAB法),其提取液成分为:100mmol/L Tris-HC(lpH8.0),20mmol/L EDTA(pH8.0),1.4mol/L NaCl,2% CTAB,1% PVP40和0.2%β-巯基乙醇(用前加)。粗提后的DNA用RNase酶去除RNA,氯仿/异戊醇抽提两次,无水乙醇沉淀,得到了RNA去除彻底、纯度高、分子量大、质量好的西瓜基因组DNA。2.建立了适于西瓜分析的AFLP银染技术体系:在20μl酶切体系中,包括基因组DNA 500ng, EcoR I和Mse I的用量各为3U,Tango Buffer 2μl,酶切时间以37℃下酶切4小时、65℃15分钟为最佳;加入接头后,37℃连接l0h以上(或过夜);连接产物稀释5倍后进行预扩增,预扩体系总体积为20μl,其中连接产物5.0μl、含Mg2+的10×Buffer 2.0μl、dNTP(2.5mM)1.6μl、Moo(50ng/μl)和Eoo(50ng/μl)各0.6μl、Taq聚合酶(5U/μl) 0.2μl;预扩增产物稀释5倍后再进行选择性扩增,选择性扩增体系亦为20μl,其中预扩产物5.0μl、含Mg2+的10×Buffer 2.0μl、dNTP(2.5mM)1.8μl、Moo(50ng/μl)和Eoo(50ng/μl)各0.8μl、Taq聚合酶(5U/μl) 0.2μl;选扩完成后,在20μl体系中加10μl Loading buffer,95℃变性10min,立即冰上冷却;在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分析,强碱银染法检测PCR产物。3.在对16个EcoR I引物和16个Mse I引物共256对选择引物组合的筛选中,有238对引物可以扩增出稳定清晰条带,表现出很高的多态性,有效引物比率达92.97%,扩增总条带数为4427条,平均每对引物扩出18.6条带,最多的一对引物扩出45条,最少的有10条。4.通过256对AFLP引物组合的筛选,获得了一个与育性位点紧密连锁的AFLP标记E31M50。该标记与育性基因遗传距离为5.0cM,序列全长为337bp。该标记可以用于分子辅助育种和不育株早期筛选。