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目的:观察噪声应激不同时程对大鼠触液核P38MAPK的表达和脑脊液P38MAPK含量的影响,探讨脑脊液中物质变化的来源及其与应激行为的关系。
方法:将成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组;噪声1d,3d,5d,7d,10d,14d组。制作1d,3d,5d,7d,10d,14d不同时程的噪声应激模型,并与正常组对照,记录应激行为。用免疫组化双标及Westem blot法观察上述时间点p38MAPK在触液核上的表达情况及脑脊液中p38MAPK含量的变化。利用Photoshop图像分析系统对Western blot染色条带测量后进行半定量分析。
结果:(1)行为学测定:正常组与噪声应激刺激1d,3d,5d,7d,10d,14d组比较均有差异19±21:38±11;35±10;37±8;834-8:32±9;16±12;均为增多趋势(P＜0.05),7d时达增多最高峰,83±8;11.0±3.2:12.0±3.6(P＜0.01);10d,14d与7d组比较为下降趋势且(P＜0.05)。
(2)免疫组化双重标记:在正常触液核中出现CB-HRP;p38MAPK:CB-HRP/p-p38MAPK三种标记细胞,其中被CB-HRP标记的的两个神经细胞簇细胞计数为32±4,其他脑区未见CB-HRP标记神经细胞簇。正常组细胞簇内仅有个别神经元见有CB-HRP/p-p38MAPK;噪声应激刺激1d,3d,5d,7d,10d,14d时CB-HRP/p-p38MAPK双重标记神经元数目分别为:0.8±1.2;6.0±5.6;5.3±4.1:5.6±3.6;12.6±3.6;5.5±4.5;0.6±0.7(P＜0.05);噪音应激10d,14d组与7d组比较,CB-HRP/p-p38MAPK双重标记神经元数目显著减少(P＜0.05)。
(3)Western。Blot检测:正常组脑脊液内仅见有极少p38MAPK;噪声应激刺激1d,3 d,5d,7d,lOd,14d时,p-p38MAPK较正常组显著增多(P＜0.05);10d,14d时与7d组比较,p.p38MAPK数目显著减少(P＜0.05)。
结论:(1)触液核中的p38MAPK参与了机体对噪声应激的信息传递或调控,其作用随应激天数增加而先日趋增加后下降。
(2)脑脊液中的p38MAPK的含量随应激天数增加先日趋增加后逐渐下降。
(3)触液核和脑脊液中p38MAPK含量的变化时相一致,其规律均是先增加后下降且高峰均在第七天出现,由于触液核与脑脊液的特定位置及关系,其胞体位于室管膜内的脑实质、突起伸入脑室腔的脑脊液内,因此断定噪声应激时脑脊液中的p38MAPK的表达与触液核相关。