一、目的　　观察不同剂量华蟾素注射液对大鼠原位移植瘤的抑制作用及对肿瘤引起的大鼠肝功能损伤的影响。此外，期望此次研究可以从整体的角度寻找到华蟾素注射液抗肿瘤作用通路，并通过体外实验对所找到的通路进行验证。　　二、方法　　本实验采用肝内隧道植入法，建立大鼠肝癌原位移植模型，随机分组，规律给药。给药结束后，眼眶取血测肝功能；测量肿瘤体积，计算抑瘤率；留取瘤组织、心、肝、脾、肺、肾组织行常规病理组织学检查；测量各组肝脏组织的丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、微量还原性谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶活力。　　此外，本实验还采用液相色谱串联飞行时间质谱，对华蟾素注射液治疗前后，肝原位移植瘤大鼠体内内源性的小分子代谢物进行轮廓分析，结合模式识别等多元统计方法，比对相关代谢物组数据库，初步探讨两者内源性小分子代谢物的差异，寻找华蟾素抗肿瘤作用相关通路。　　最后，本实验以C2-神经酰胺和神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉毒素作为工具药，采用MTT法验证华蟾素通过神经酰胺通路发挥其抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用。　　三、结果　　通过对华蟾素注射液抗大鼠肝原位移植瘤模型的整体药效学观察可知：相对于模型组，华蟾素给药组荷瘤大鼠体重增加显著，生活状态更佳。华蟾素注射液能显著抑制肿瘤生长，其中华蟾素低剂量组及高剂量组抑瘤率分别为28.46％及36.87％。肿瘤病理切片HE染色显示，华蟾素低剂量及高剂量组瘤组织多中、重度坏死，但其他重要脏器组织无明显损害。肝功能检测结果显示，华蟾素注射液可显著降低造模大鼠的TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP及γ-GT水平。肝组织生化指标检测结果显示，华蟾素注射液可显著降低造模大鼠肝组织匀浆中增高的MDA，并显著提高肝匀浆中SOD、GSH-PX活力及GSH含量。　　对所采集到的各组大鼠血清样本进行代谢组学研究，共筛选出19种差异代谢物，通过数据库比对，确认了10种潜在生物标志物，包括苯丙氨、亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、色氨酸、色氨酸片段、C16鞘氨醇、植物鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇、二甲基鞘氨醇。主要可被分为两类：①氨基酸类，与氨基酸代谢相关；②鞘氨醇类，与神经酰胺代谢相关。　　对华蟾素注射液抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖的神经酰胺通路进行体外细胞学研究发现：12.5～100μmol/L的C2-神经酰胺及0.225～1.8μg/ml的华蟾素处理细胞48h后明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖，且随着药物浓度的增加，细胞存活率降低。烟曲霉素(200，100，50μmol/L)对人肝癌SMMC-7721细胞增值无明显作用。但相同浓度的烟曲霉素预处理24h可对抗C2-神经酰胺及华蟾素对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。200μmol/L的烟曲霉素处理细胞可使C2-神经酰胺(50，25μmol/L)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用降至34.58％及16.15％；使华蟾素(1.8，0.9μg/ml)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用降至24.70％及11.83％。　　四、结论　　华蟾素注射液对大鼠肝原位移植瘤具有明显的抑制作用，有效剂量的华蟾素对主要脏器无明显毒副作用。华蟾素注射液还能有效改善荷瘤状态下大鼠肝功能状况，且可能是通过清除自由基、保护细胞膜和抗脂质过氧化发挥肝细胞保护作用。而华蟾素注射液的干预对荷瘤大鼠的氨基酸代谢及神经酰胺代谢均有影响。体外研究结果也表明神经酰胺通路可能在华蟾素的抗肿瘤作用中起扮演重要角色。