乙型肝炎病毒是一种非细胞致病性、有完整包膜的双链DNA病毒，能引起急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。人类乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科，至少有4种亚型：ayw、adr、ayr、和adw，其中adr亚型是中国人的流行株，其基因组DNA已被克隆，全长3.2kbp，与其他3种亚型在DNA水平和蛋白水平具有一定差异。HBV基因有4个开放阅读框，其中HBx基因是HBV感染和复制所必需的基因，编码基因位于1374～1838核苷酸之间，全长465bp，其表达产物为17kDa（154个氨基酸）的X蛋白。目前发现它具有多种功能：可对多种病毒、细胞启动子、增强子成分发挥反式激活作用；可与p53蛋白结合；可参与多条信号转导通路；具有抑制DNA切除修复的作用；参与细胞周期调控和细胞凋亡。但是，人们对X蛋白在HBV生活周期中的确切作用还不明了。本研究采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和HBx基因（adr亚型）开放阅读框的HBx基因表达载体pcDNA3-HBx，酶切鉴定证实载体构建成功，DNA测序证实插入的HBx基因序列与报道的序列一致。该载体转染入Hela细胞后，免疫细胞化学检测发现X蛋白可在Hela细胞的细胞质和/或细胞核中表达。将该载体经SalⅠ限制性内切酶线性化后，用原核显微注射法将其注射入受精卵雄原核，制备转基因小鼠，共得到11只存活的新生鼠。经复合式PCR方法检测后获得5只Founder转基因小鼠，命名为C57-TgN（HBx）SMMU。免疫组织化学检测发现X蛋白主要在肝细胞质中表达，蛋白印迹证实转基因小鼠肝细胞中表达的X蛋白分子量正确，免疫金标电镜进一步证实肝细胞质中存在X蛋白。将获得的C57-TgN（HBx）SMMU转基因小鼠进行传代培育和建系，目前已到F4代。同时对该品系小鼠的表型进行了初步分析，常规病理学分析显示该转基因小鼠的肝脏和肺脏出现轻度变性，免疫组织化学检测显示肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织的细胞质中均有X蛋白表达，在部分肝组织的细胞核中也存在X蛋白。本研究还从体内外途径入手，对X蛋白与细胞凋亡的关系进行了初步研究。体外实验发现，转染了HBx基因表达载体pcDNA3-HBx的Hela细胞出现了细胞凋亡的形态学改变，流式细胞仪检测发现此细胞凋亡率增高；体内实验发现，C57-TgN（HBx）SMMU转基因小鼠的肝细胞凋亡率明显增高。这些结果表明X蛋白可诱导细胞凋亡，为进一步研究X蛋白诱导细胞凋亡的机理奠定基础。最后，本研究还利用DNA免疫的方法对X蛋白的致病性进行了一些探索。结果显示，用HBx基因表达载体pcDNA3-HBx免疫小鼠后，可引起肾脏间质细胞形态异常，肾脏中有细小的免疫复合物沉积，这对X蛋白的致病性有所揭示。