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转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)是T-box基因家族的新型转录因子,含530个氨基酸,其中有一个189个氨基酸组成的能与T盒DNA结合的结构域。人与小鼠的TBX21基因(编码T-bet)具有88％的同源性。T-bet在原初 T细胞向Th1方向分化时具有重要的作用。T-bet作为Th1细胞的谱系限定转录因子,对于Th1细胞的分化及稳定起了非常重要的作用。同时T-bet又能通过抑制其他细胞亚型的细胞因子的表达从而抑制其分化。Th1细胞也称为炎症性 T细胞,介导并参与细胞内病毒和局部炎症有关的免疫应答,参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的形成,目前报道与多种自身免疫疾病相关,尤其与人类的自身免疫病多发性硬化症有关。本文主要通过小鼠T-bet启动子荧光素酶报告基因载体的构建和对 T-bet转录因子的筛选,为了解 T-bet在其引起Th1等辅助T细胞介导的自身免疫疾病中的信号转导及转录调控机制,并研究其在多发性硬化症中的信号通路提供了方向。研究结果如下: 1.本研究构建了小鼠 T-bet基因启动子区和非编码保守序列(No-coding conserved sequence, CNS)萤火虫荧光素酶报告基因载体,与转染空质粒pGL4.10组相比,293T细胞(P=0.0122)和Jurkat细胞(P=0.0022)中转染 pGL4.10-TBX21pr-CNS组荧光素酶活性升高。研究结果表明在293T细胞和Jurkat细胞中pGL4.10-TBX21pr-CNS可以表现出启动子活性。 2.用人的848个转录因子表达质粒pLenti6.2/V5-DEST-TFs与T-bet启动子荧光素酶重组质粒共转染293T细胞,筛选到可能调控 T-bet转录的转录因子有16个。其中EBF、PJA1、CEBPE、SSX2特异与CNS作用影响T-bet的转录。 有报道EBF敲除的淋巴细胞中GATA3的表达上调,然而EBF是通过何种方式下调GATA3的表达并不清楚。此外,有报道称而GATA3与T-bet相互抑制表达。而我们的实验结果表明 EBF上调了 T-bet的表达。因此,我们猜想EBF可能通过抑制了GATA3的表达从而促进了T-bet的表达。这为进一步研究T-bet在其引起Th1等辅助T细胞介导的自身免疫疾病中的信号转导及转录调控机制提供了方向。