【摘 要】
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该研究从受西维因长期污染的土壤中通过富集培养、分离筛选到5株具有降解西维因活性的真菌,对其中降解率最高的菌株PY168进行了研究.结果如下:菌株PY168经鉴定为黑曲霉(Asper
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该研究从受西维因长期污染的土壤中通过富集培养、分离筛选到5株具有降解西维因活性的真菌,对其中降解率最高的菌株PY168进行了研究.结果如下:菌株PY168经鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger),能以西维因为唯一碳源进行生长.菌株降解西维因的最适培养温度和pH分别为30℃和7.5,最适浓度为800mg·L-1,所需要时间为96 h,降解率达91％;在40℃以下以及在6.5-8.5 pH范围内菌株生长良好.菌株PY-168产生的西维因水解酶为胞内酶,粗酶液经硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose、DEAE-Sephrose CL-6B和Sephacryl 200 HR层析等方法,获得了电泳纯的西维因水解酶.通过凝胶过滤层析测得其分子量为48kDa,其等电点为pH 4.6.该酶的最适反应温度为45℃,最适pH 7.5,在50℃以下及pH5.0-8.5范围内活性稳定.Hg<2+>、Ag<+>、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸对该酶有强烈的抑制作用,而EDTA、邻二氮杂菲和其它金属离子对酶活没有明显的影响.底物专一性实验表明,该酶能作用于多种氨基甲酸酯类农药.以西维因为底物,酶反应的米氏动力学常数K<,m>值、V<,max>值、k<,cat>值分别为12uM、931μmol·min<-1>、1724s<-1>.与已报道的细菌西维因水解酶相比,黑曲霉PY168产生的水解酶具有更为理想的催化作用.
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