论文部分内容阅读
目的： 为探讨血管内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)在骨缺损修复重建中的作用机制，本研究通过分离、培养、鉴定大鼠骨髓源的EPCs、BMSCs，并建立EPCs与BMSCs非接触式同培养体系以研究EPCs对向成骨细胞诱导的BMSCs的生物学行为的影响。 方法： 体外培养大鼠骨髓来源的血管内皮祖细胞(EPCs)、骨髓间充质干细胞(bonemarrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，对EPCs、BMSCs进行鉴定。成骨诱导剂诱导BMSCs向成骨细胞分化，利用Transwell小室(孔径0.4μ m)将EPCs与诱导成骨的BMSCs按1∶1比例进行非接触式同培养，建立实验组（单纯诱导成骨的BMSCs为对照组），研究EPCs对BMSCs存活、分化等生物学行为的影响，并通过CCK-8（Cell Counting Kit-8）试剂盒检测EPCs对BMSCs细胞存活的影响。RT-PCR检测EPCs-BMSCs共培养组中，BMSCs向成骨细胞诱导后碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原基因(ColⅠ)基因的表达，从而检测EPCs对BMSCs向成骨细胞诱导中是否有促进作用。 结果： 1、CCK-8检测结果表明，培养72h后EPCs-BMSCs共培养组的吸光度OD值要显著高于对照组（BMSCs单接种）。 2、RT-PCR检测结果显示，EPCs-BMSCs共培养组中BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原基因(ColⅠ)基因高表达，而对照组的BMSCs中ALP、OC、ColⅠ低表达。 结论： 1、EPCs-BMSCs共培养组中BMSCs的存活能力明显高于对照组，提示EPCs可能是通过分泌一些细胞因子，促进BMSCs存活的能力，具体这些细胞因子促进BMSCs的存活机制，还有待进一步研究。 2、EPCs可具有促进BMSCs成骨分化的能力，其具体机制还待进一步研究。