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背景脂滴是细胞内脂肪的储存方式,也是一种复杂的多功能细胞器,参与了细胞的许多生物学过程。多种复杂的代谢性疾病,如肥胖、高血脂等都伴随着细胞脂滴数量和功能的异常,表明脂滴直接或间接参与了相关疾病的发生。研究发现,脂滴可以参与组织细胞的免疫应答调节,特别是参与淋巴细胞功能调节,相关疾病的发生可能与脂滴诱导的淋巴细胞免疫调节功能紊乱有关,但详细机制还不清楚。成人T细胞白血病(adult T-cell leukemia, ATL)是与人类T细胞白血病Ⅰ型病毒(human T-cell leukemia vires type-1, HTLV-1)感染直接相关的疾病。从HTLV-1感染到发病长达数十年之久,在如此漫长的潜伏期中,细胞的脂质代谢有何变化?特别是HTLV-1对T细胞的脂类代谢有何影响?这些变化是否会引起细胞免疫应答紊乱,进而诱发ATL,这些问题还不清楚。因此,深入研究]HTLV-1型病毒对细胞脂质代谢的影响,具有十分重要意义。目的1.观察细胞共培养之后的脂滴变化的特征,探讨HTLV-1病毒感染后,Jurkat细胞和HepG2细胞脂代谢的影响。2.分析HTLV-1病毒感染对Jurkat细胞和HepG2细胞生存状态和凋亡的影响。3.检测HTLV-1病毒感染后与脂质代谢相关基因的表达变化,初步探讨病毒感染影响细胞脂代谢的机制。方法1.细胞培养：(1)将秋水仙素处理后的携带有HTLV-1病毒的MT2细胞与人外周血白血病T淋巴细胞株Jurkat细胞共培养,24h后分别用油HO (Oilred)染色,与未处理的对照组Jurkat细胞比较,观察脂滴的变化。(2)同样方法共培养人肝癌细胞株HepG2细胞,与未处理的HepG2细胞比较,观察脂滴的变化。2.收集共同培养组和对照组细胞,分别提取RNA和蛋白质,用普通PCR/Real-timePCR和Western Blot检测HTLV-1特征性蛋白Tax的表达变化,证明两种细胞感染成功。3.收集共同培养组的细胞和对照组的细胞,尼罗红(Nile red)染色后,流式分析细胞脂滴变化和凋亡情况。4.成功构建Pcmv-Tax、PcDNA6-HIF1α重组质粒后,电穿孔转染到Jurkat细胞,Western Blot检测基因的表达。5.统计学分析：用SPSS19.0软件进行分析实验数据,实验结果以均数±标准差(x±s)方式表示,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为差异具有显著性。结果1.显微镜观察细胞形态Jurkat细胞与MT2细胞共同培养24h后,在倒置显微镜下观察发现,MT2细胞被Jurkat细胞紧紧包裹,类似“花团”状。而HepG2细胞与MT2细胞共同培养24h后,在倒置显微镜下观察发现,两种细胞只是散在分布。2.油红O染色后显微镜观察脂滴Jurkat细胞被HTLV-1病毒感染后脂滴明显多于对照组；而HepG2细胞被HTLV-1病毒感染后脂滴与对照组无明显区别。抽提脂滴半定量测定,HTLV-1病毒感染后Jurkat细胞脂滴数明显多于对照组,而病毒感染后HepG2细胞脂滴数略多于对照组。3.尼罗红染色后流式检测结果 病毒感染的Jurkat细胞内脂滴多于对照组,感染后HepG2细胞脂滴与对照组相比,无明显变化。与对照组Jurkat细胞相比,感染HTLV-1病毒的Jurkat细胞凋亡数目增多。4.PCR和Western Blot检测结果HTLV-1感染的.Jurkart细胞,Tax、HIF 1α、ADRP、 CAV1、 P65等基因表达上调。5.重组质粒Pcmv-Tax、PcDNA6-HIF1α转染结果成功将电转Jurkat细胞后,Western Blot检测结果显示,Tax、HIF1α蛋白有所表达。结论1. HTLV-1病毒可以增加Jurkat细胞脂滴积累,同时伴有脂代谢相关基因表达的变化,特别是低氧诱导因子HIF1α表达明显上调,可能是HTLV-1导致Jurkat细胞脂积累的一个重要因素。2.HTLV-1病毒感染非淋巴HepG2细胞后,其脂滴变化不明显。