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本文基于毛细管液相色谱和加压毛细管电色谱分析技术作为代谢组学研究手段,并结合样品在线富集的方法对玉米的一些代谢组分进行了分析测定。主要内容如下:
1.建立用毛细管液相色谱(CLC)同时测定脂溶性维生素和β—胡萝卜素的方法,以C18反相硅胶整体柱为分离柱,用紫外/可见光谱法检测。采用溶剂梯度区带压缩效应作为在线富集技术来提高检测灵敏度。用该方法所测的脂溶性维生素和β—胡萝卜素的检测限为6—30 ng/mL范围内。与传统的进样方式相比,采用在线富集技术时,脂溶性维生素和β—胡萝卜素的检测灵敏度提高了34—60倍。该方法用来分析玉米样品,成功检测到维生素VE,并对维生素VE进行了定量分析。
2.建立用加压毛细管电动色谱(pCEC)测定植物内源激素的方法,以C18反相硅胶整体柱为分离柱,用紫外/可见光谱法检测。本实验应用溶剂梯度效应和场增强样品堆积两种在线富集技术来提高检测灵敏度。用该方法所检测的植物激素的检测限在0.05-0.25μg/mL范围内。与传统进样方式相比,植物激素的检测灵敏度提高9—23倍。该方法用来检测玉米种子中的植物激素含量。
3.建立用梯度加压毛细管电色谱测定黄酮类物质的方法。梯度洗脱模式用来提高结构相似的不同黄酮类物质的分离度,同时被用作在线富集技术来提高检测灵敏度。实验证明,该方法通过大体积进样(5μL),与传统进样方式(进样体积为0.2μL)相比,黄酮类物质的检测灵敏度提高9—20倍。在梯度条件下,六种黄酮类物质的检测限范围是6.5—46 ng/mL。该方法用来分析和比较两种转基因玉米和五种非转基因玉米样品中的黄酮类物质种类和含量。