黑龙江省水稻立枯病菌的分离鉴定、分布和遗传多样性研究

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水稻是我国的主要粮食作物之一,在我国整个农业生产中占有重要的地位。黑龙江省是主要的水稻产区,种植面积逐年增加。近年来,黑龙江省水稻立枯病呈加重趋势。对于黑龙江省立枯病原种类鉴定研究很少,只有1999~2001年郑雯等对黑龙江省密山市采集的水稻幼苗立枯病原种类进行了鉴定。本研究于2010~2012年在黑龙江省16个市县的水稻产区进行了水稻立枯病的调查取样和病原菌的分离保存,通过对病原菌的形态学鉴定、分子生物学鉴定、致病性测定、分布和多样性的研究,明确了黑龙江省水稻立枯病菌的种类、分布和遗传多样性,为黑龙江省水稻立枯病的防治奠定重要的基础。在黑龙江省共采集分离到了351株菌,通过鉴定确定为镰刀菌属的7个种,分别为尖孢镰刀菌(F. oxysporum)为119株,分离比率为33.9%、燕麦镰刀菌(F. avenaceum)为10株,分离比率为2.8%、木贼镰刀菌(F. equiseti)为31株,分离比率为8.9%、腐皮镰刀菌(F.solani)为30株,分离比率为8.5%、F. commune为14株,分离比率为4.0%、轮枝镰刀菌(F.verticillioides)为138株,分离比率为39.3%、层出镰刀菌(F. proliferatum)为9株,分离比率为2.6%。尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和轮枝镰刀菌(F. verticillioides),分离比例总共为73.2%,其他镰刀菌总共的分离比率为26.8%。从分离结果可以看出:尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和轮枝镰刀菌(F. verticillioides)在16个市县区均有分布,具有普遍的分布性;燕麦镰刀菌(F. avenaceum)仅在五常、宁安、富裕和方正分离得到;木贼镰刀菌(F. equiseti)在海林、桦南、富锦、五常、依安、方正和鸡西分离得到;腐皮镰刀菌(F. solani)在海林、密山、五常、852农场、宁安、杜蒙和牡丹江分离得到;F.commune在海林、庆安、桦南、富锦、852农场分离得到;层出镰刀菌(F. proliferatum)仅仅在密山、宁安、牡丹江和方正分离得到。致病性测定结果可以看出各个地区分离到的菌株间致病性都存在差异,但是尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和轮枝镰刀菌(F. verticillioides)的致病性相对较强,腐皮镰刀菌(F. solani)、木贼镰刀菌(F. equiseti)、燕麦镰刀菌(F.avenaceum)和层出镰刀菌(F. proliferatum)的致病性相对较弱,而分离到的所有F. commune都不具有致病性,说明其只是一种腐生菌,不引起水稻的立枯病。应用AFLP分子标记技术对351株镰刀菌进行了遗传多样性的检测。99对AFLP引物组合共筛选出了12对多态性好、带型清晰的引物组合,对351株镰刀菌进行AFLP分析均得到清晰的电泳谱带。用NTSYSpc2.0软件构建了树状图,聚类分析结果表明黑龙江省水稻立枯病菌的遗传分化较大,不同地区群体具有丰富的遗传多样性。
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