【摘 要】
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目的：
1.利用已构建的Neuritin酵母表达系统大量诱导表达Neuritin蛋白，并进行纯化及鉴定；
2.对Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞进行功能检测，明确Neuritin对骨髓基
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目的：
1.利用已构建的Neuritin酵母表达系统大量诱导表达Neuritin蛋白，并进行纯化及鉴定；
2.对Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞进行功能检测，明确Neuritin对骨髓基质细胞（MSCs）的定向分化的作用。
方法：
1.Neuritin蛋白的诱导表达及纯化鉴定：采用甲醇诱导毕赤酵母表达Neuritin蛋白，采取硫酸铵饱和沉淀、Ni-NAT亲和层析、透析、浓缩等步骤对表达产物进行纯化，SDS-PAGE和Westrern blot鉴定产物；
2.对Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞进行功能检测：（1）诱导后的神经元样细胞的电生理检测：采用膜片钳技术观察分化前后的膜特性变化以及膜离子通道的情况。（2）诱导后的神经元样细胞分泌神经递质的检测：用薄层层析法检测神经递质5-羟色胺。（3）诱导后的神经元样细胞的细胞间突触联系的检测，利用免疫荧光染色检测突触素。
结果：
1.诱导表达的Neuritin蛋白经纯化鉴定显示：人Neuritin酵母表达产物的分子量约为11Kda左右；经Western-blot证实为Neuritin，且具有一定的免疫活性。
2.Neuritin诱导的骨髓源性神经元样细胞的功能检测结果显示：（1）电生理检测分化前后的膜特性有显著差异，并记录到外向延迟整流K+电流和内向整流K+电流。（2）诱导后的神经元样细胞有5-羟色胺的分泌。（3）突触素检测结果为阴性。以上结果显示Neuritin蛋白可定向诱导MSCs的分化为神经元样细胞。
结论：
1.对毕赤酵母分泌表达Neuritin蛋白进行有效的纯化和浓缩，经Western-blot证实为Neuritin。
2.Neuritin蛋白具有定向诱导MSCs分化为神经元样细胞的生物学功能。
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