Adipophilin通过ERK1/2-AP-1途径影响炎症因子的表达

来源 :南华大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wujuan0902
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目的:观察巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)对炎症因子表达的影响,阐明adipophilin促进巨噬细胞炎症因子表达的机制。方法:将已构建成功的adipophilin稳定高表达和低表达逆转录病毒载体转染入PA317包装细胞,收集病毒液,感染RAW264.7细胞,制备adipophilin高和低表达的细胞。实验共分五组,(1)对照组,未经处理的RAW264.7细胞;(2)表达对照组,感染PQCXIP包装病毒的RAW264.7细胞;(3)高表达adipophilin组,感染PQCXIP-HA-Adi包装病毒的RAW264.7细胞;(4) siRNA对照组,感染pSUPER-retro-scramble siRNA包装病毒的RAW264.7细胞;(5)adipophilin siRNA组,感染pSUPERpsuper-retro-adi siRNA包装病毒的RAW264.7细胞。将各组细胞培养48小时,待细胞约铺满95%以上,换无血清培养基培养12小时,收集已转染成功的各组细胞上清液,用ELISA方法检测IL-6、TNF-α、MCP-1在细胞培养液中的浓度。Western blot检测各组细胞AP-1、p-AP-1,ERK1/2及p-ERK1/2的表达。用ERK1/2阻断剂PD98059或AP-1阻断剂curcumin孵育细胞2小时,检测各组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、AP-1、p-AP-1和adipophilin蛋白的表达;用ELISA方法检测IL-6、TNF-α、MCP-1在细胞培养液中的浓度。结果:与对照组(con)相比,高表达adipophilin细胞上清液中炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α浓度明显增高,adipophilin siRNA组细胞中的炎症因子降低,差别有显著性,而表达对照组和siRNA对照组炎症因子的浓度没有显著变化。与对照组相比,高表达adipophilin组细胞中p-ERK1/2和p-AP-1蛋白表达增加,adipophilinsiRNA组表达减少,差别有显著性。ERK1/2抑制剂PD98059对adipophilin蛋白表达没有明显影响,显著抑制ERK1/2蛋白表达,AP-1蛋白表达明显下调,与对照组相比,差别有显著性。给予AP-1抑制剂curcumin后,adipophilin和ERK1/2蛋白表达没有明显改变,AP-1蛋白表达明显下调,与对照组相比,差别有显著性。同时,细胞培养液中的IL-6、MCP-1和TNF-α浓度明显下降,与对照组相比,差别有显著性。结论:adipophilin在RAW264.7巨噬细胞中能够促进炎症因子的表达。 Adipophilin促进巨噬细胞炎症因子的表达可能是通过ERK1/2-AP-1信号途径。
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