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肝脏是人体多能性器官,具有解毒,物质合成,调节营养代谢平衡的功能。一些疾病如:肝癌,乙肝,肝硬化会引起肝功能的失调。这些疾病的治疗尚依靠于人们对肝功能的进一步了解。以肝癌组织中下调表达的cDNA片段为探针,我们克隆到一个957bp的cDNA,并命名为TCP10L,利用人16种组织的杂交膜对TCP10L基因的表达谱进行了检测,Northern杂交结果显示该基因只在睾丸和肝脏中表达。生物信息学分析表明TCP10L定位于人21q22.11,由5个外显子和4个内含子组成。其转录本包含一个645bp的开放阅读框,编码一条215个氨基酸的多肽。多肽的N端具有一个典型的亮氨酸拉链结构。亮氨酸拉链是转录因子的基本识别模块,因此我们用双荧光酶检测系统研究了TCP10L基因的转录活性。实验结果显示与阴性对照相比,TCP10L基因显著抑制报告基因pGAL45tkLuc在CHO,HEK293和SK-HEP-13种不同的细胞株中的表达。将TCP10L基因的ORF装到原核表达载体pET32a,并在原核系统E.coli.(BL21DE3)中进行了重组表达。纯化到的重组融合蛋白约42kD,并以其为抗原,在新西兰大白兔中制备了多克隆抗体。利用纯化的多克隆抗体,我们在人的睾丸、肝脏等组织进行了免疫组化研究。多克隆抗体在睾丸,肝脏组织有较强的杂交信号,而在其它组织中检测不到,这与TCP10L的Northern Blot结果相一致。在肝脏组织切片中,杂交信号出现在肝癌和癌旁组织的细胞中,而在结缔组织细胞中信号很弱;在睾丸组织切片中,杂交信号在生精小管中出现,并且特异的出现在初级精母细胞阶段。 通过酵母双杂技术,我们得到了可能与TCP10L基因相互作用的2个基因。一个基因为PMF1,另一个为MAD4基因,这两个基因都是转录因子。鉴于酵母双杂交存在假阳性,我们将TCP10L基因及PMF1和MAD4进行了亚细胞共定位,以进一步验证酵母双杂交的结果。TCP10L基因的表达蛋白(发红色光)与PMF1和MAD4表达蛋白(发绿色光)共同在细胞核中表达,具有较好的重叠性。但这三个基因的表达蛋白在核内部都呈弥散分布,这为准确判定它们的共定位带来了困难。我们将进一步摸索它们共定位的条件,以获得更有说服力的照片,同时进行免疫共沉淀的研究,从另一个方面验证它们的相互作用。