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本文主要从以下几个方面进行研究： 第一部分 miR-4530靶基因的预测分析及3UTR验证 目的： 通过生物信息学软件TargetScanHuman6.2预测分析miR-4530的靶基因并筛选出作为研究对象的靶基因，将miR-4530质粒与携带有靶基因的3UTR序列的荧光素酶报告载体(psiCHECK-2)的重组质粒共转染人肾上皮细胞（293T细胞），利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性，分析miR-4530与靶基因之间是否存在靶向性的结合。 方法： 1)使用生物信息学软件TargetScaHuman6.2预测分析，筛选出与miR-4530相关性最高的5个靶基因。 2)将含有已确定靶基因的3UTR的重组质粒分别与miR-4530质粒、NC质粒和空白对照（不含质粒）共转染293T细胞。 3)通过双荧光素酶报告基因系统检测miR-4530与相应靶基因是否存在靶向性结合关系。 结果： 1)通过生物信息学软件TargetScanHuman6.2筛选出miR-4530对应的5个相关性高的靶基因包括:RASA1(RAS p21 protein activator1)、PTCD3(Pentatricopeptide repeat domain3)、PANK1(Pantothenate kinase1)、FGFR1(Fibroblast growth factor receptor1)和VASH1(Vasohibin1)，通过查阅文献并确定VASH1为靶基因。 2)双荧光素酶报告基因实验显示，共转染组的荧光素酶活性分别与NC组和对照组相比，荧光素酶的活性均出现降低，有非常显著的统计学差异(P＜0.001v.s.NC，P＜0.001 v.s.空白对照)。 结论： 筛选出miR-4530可能的5个相关性高的靶基因，并通过查阅文献，最终确定靶基因为VASH1。双荧光素酶报告基因实验显示，过表达miR-4530质粒可以与VASH1的3UTR全序重组质粒特异性结合，并抑制下游荧光素酶的表达，确定VASH1是miR-4530的直接靶向基因。 第二部分 miR-4530对HUVEC细胞管腔形成的影响 目的： 将miR-4530 mimics、mimics NC、miR-4530 inhibitor、inhibitor NC分别转染HUVEC细胞后，通过基质胶成管实验观察miR-4530是否对HUVEC细胞管腔形成能力产生影响。 方法： 1)通过HUVEC细胞转染不同浓度NC-FAM，观察转染后的荧光确定最适合的转染浓度。 2) HUVEC细胞分别转染miR-4530 mimics、mimics NC、miR-4530 inhibitor、inhibitor NC与空白对照。 3)用Matrigel基质胶孵育转染完成的HUVEC细胞，观察转染miR-4530 mimics和miR-4530 inhibitor后对HUVEC细胞管腔形成能力的影响，来验证过表达miR-4530和抑制miR-4530分别对HUVEC细胞生物学功能的作用。 结果： 1)通过观察HUVEC细胞转染NC-FAM的荧光强度，确定最适的转染浓度为6孔板中30 pmol/孔。 2) HUVEC细胞转染miR-4530 mimics、mimics NC、miR-4530 inhibitor、inhibitorNC与空白组后，通过Matrigel基质胶成管实验，观察到转染miR-4530 mimics组分别与mimics NC组和对照组相比管腔的形成数量减少，存在统计学差异（P＜0.05 v.s.mimics NC，P＜0.05 v.s.空白对照）。转染miR-4530 inhibitor组分别与inhibitor NC组和对照组相比管腔的形成数量增加，存在统计学差异(P＜0.05 v.s.inhibitor NC，P＜0.05 v.s.空白对照)。 结论： 通过Matrigel基质胶培养HUVEC细胞的管腔形成能力实验，发现过表达miR-4530可以抑制管腔形成，抑制miR-4530可以促进管腔形成。说明转染miR-4530的确对HUVECs的管腔形成的能力产生了影响。 第三部分 HUVEC细胞转染miR-4530和miR-4530Sponge对VASH-1表达情况的影响 目的： miR-4530增强子质粒、miR-4530 Sponge抑制子质粒和NC质粒分别转染HUVEC细胞，分别在VASH1的mRNA和蛋白水平验证miR-4530对其表达情况的影响。 方法： 1)使用灭瘟素筛选HUVEC细胞，确定最适合的筛选浓度。 2)转染miR-4530增强子质粒、miR-4530 Sponge抑制子质粒和NC质粒，通过使用灭瘟素筛选，构建稳转的细胞株。 3)筛选出miR-4530过表达、低表达和NC细胞株后，通过荧光定量PCR和Western blot检测稳转的细胞株miR-4530的表达情况、VASH1的mRNA水平的变化和VASH1蛋白水平的变化。 结果： 1)根据灭瘟素筛选的结果，确定灭瘟素浓度12μl/ml为HUVEC细胞的最适筛选浓度。 2) HUVEC细胞转染miR-4530增强子、miR-4530 Sponge与NC组后，转染miR-4530组和miR-4530 Sponge组与NC组相比在miR-4530水平分别明显升高和降低，存在非常显著的统计学差异(P＜0.001 miR-4530 v.s.NC，P＜0.001miR-4530 Spongev.s.NC)。在mRNA水平，转染miR-4530组和miR-4530Sponge组与NC组相比VASH1的mRNA水平分别明显降低和升高，存在非常显著的统计学差异(P＜0.001 miR-4530 v.s.NC，P＜0.01 miR-4530 Sponge v.s.NC)。在蛋白水平，可以看到蛋白的变化有显著的统计学差异(P＜0.01miR-4530 v.s.NC, P＜0.05 miR-4530 Sponge v.s.NC)。 结论： HUVEC细胞转染miR-4530增强子、miR-4530 Sponge与NC组后，与NC组相比在miR-4530组和miR-4530 Sponge组中miR-4530的水平分别升高和降低，说明转染的质粒在HUVEC细胞中稳定表达。在mRNA水平，转染miR-4530组和转染miR-4530 Sponge组与NC组相比VASH1的mRNA分别降低和升高。这个现象说明miR-4530与VASH1靶向性结合能够对VASH1的mRNA的表达水平进行调节。结合上一部分的实验，可以发现miR-4530很可能是通过调节VASH1的mRNA水平从而影响VASH1的蛋白水平，说明miR-4530很可能通过调节VASH1的表达而影响HUVEC细胞的管腔形成能力。