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本文包括两部分:一、在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计实验,运用响应面分析法(RSM)和人工神经网络结合遗传算法(ANN-GA)优化密花石斛总多糖(DDP)的超声辅助提取工艺参数,获得密花石斛总多糖的两种超声辅助提取工艺条件,并比较两种工艺提取所得密花石斛总多糖的免疫活性差异;二、热水浸提获取密花石斛水提总多糖,水提总多糖经DEAE-纤维素树脂分离,收集多糖水洗组分(DDP-W),采用黏度法、比旋光度法、HPGPC、FACE、单糖组成、甲基化分析、AFM、DSC、FT-IR及MTT法等物化方法和现代仪器分析了不同功率的超声波对DDP-W黏度、旋光度、分子量、免疫活性等性质的影响;以期为不同来源多糖的超声提取条件的选取及是否适合运用超声辅助技术提取提供理论支持。
实验结果表明,RSM及ANN-GA优化的密花石斛总多糖的超声辅助提取工艺条件分别为68℃、567 w、101 min和59℃、424 W、99 min;两种最优提取条件下所得总多糖的提取率分别为37.4563±0.5656 mg/g和37.9905±0.3744mg/g、脾细胞增殖活性分别为54.71±2.58%和65.08±2.54%、协同脂多糖(LPS)诱导小鼠脾细胞产生TNF-α水平分别为121.20±2.30 pg/mL和128.82±2.00 pg/mL。
结果还表明,与未经超声处理的DDP-W相比,分别经300 w和600 w超声处理后的DDP-W的多糖组分,分散度增加,聚集体变小:多糖链发生部分降解,黏度、比旋光度及高分子量组分分子量降低,但低分子量组分分子量变化不明显;凝胶焓升高,结晶度增加;单糖糖苷键的连接方式及各连接方式摩尔比发生显著变化;对脾细胞增殖活性分别升高了28.23%和18.00%。
综上,本研究结果提示,不同强度的超声波对多糖的理化性质及生理活性有一定的影响,因此,采用超声辅助提取技术提取不同来源的多糖时,应当选取合适的超声辅助提取条件,以为保证其生理活性。