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目的：研究甲基莲心碱(NeD逆转K562/G01细胞株对伊马替尼(STl571)的耐药性，探讨Nef逆转K562/G01细胞MDR的机制。
方法：采用改良四唑盐法(MTT)检测细胞毒性；高效液相色谱(HPLC)法测定Nef对K562/G01细胞内STl571的积聚浓度的影响；蛋白质免疫印迹(Westem-Bloting)法检测Nef对K562/G01细胞P-gp的表达影响；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Nef对K562/G01细胞mdr-1基因表达的影响。
结果：(1)①Nef 16、32、64μmaol·L-1对K562/G01细胞及K562细胞均有抑制细胞增殖的作用，随着剂量的增加，作用也增加。②STl571对K562细胞的IC50为0.55±0.12μmol·L-1，对K562/G01细胞的IC50为24.33±1.93μmol·L-1，K562/G01细胞对STl571耐药的是K562细胞的43.99倍；Nef(4lamol·L-1)、Nef(8μmol·L-1)、维拉帕米(VRP)(10gmol·L-1)分别联合STI 571处理K562/G01细胞后，均不同程度的降低了STl571对K562/G01的IC50，由原来的24.33±1.931maol·L-1分别降至13.42±0.73μmaol·L-1、10.15±1.27μmaol·L-1、9.70±0.411amol·L-1，逆转倍数分别为1.81、2.35、2.50，相对逆转率分别为45.9％、60.0％、61.5％，Nef随着剂量的增加，逆转作用也增强(P<0.05)；NefSgmol·L-1组逆转作用与VRP10μmol·L-1组无统计学差异(P>0.05)。(2)①吸收1h和3h后，K562细胞内STl571含量(分别为1.8069±0.1890μmol·L-1和2.349±0.0736μmol·L-1)均高于K562/G01细胞内STI571含量(分别为0.1991±0.0193μmaol·L-1和0.1987±0.0196μmol·L-1)(P<0.01)。②吸收1h和3h后，分别经Nef,VRP处理组的K562/G01细胞STl571含量均较未经药物处理组的K562/G01细胞内STl571含量高(P<0.01)。⑧吸收1h后，Nef处理组的K562/G01细胞内STI571含量低于VRP处理组的K562/G01细胞内STI571含量(P<0.01)；吸收3h后，Nef处理组的K562/G01细胞内STI571含量略高于VRP处理组的K562/G01细胞内STI571含量，但无统计学差异(P>0.05)。(3)①K562/G01细胞P-gp表达(0.5956±0.0185)较K562细胞P-gp表达(0.0285±0.0098)增高(P<0.01)；分别经Nef(8gmol·L-1)、VRP(10μmol·L-1)处理48h和96h后K562/G01细胞P-gp表达均较未经药物处理组K562/G01细胞P-gP表达减低(P<0.01)；且96h组均低于48h组(P<0.01)；Nef(8μmaol·L-1)处理48h或96h K562/G01细胞P-gP表达分别较VRP(10μmol·L-1)48h或96h K562/G01细P-gP表达无统计学差异(P>0.05)。②K562/G01细胞mdrl基因表达(0.9783±0.0873)较K562细胞mdr-1基因表达(0.0191±0.0239)增高(P<0.01)；分别经Nef(8μmol·L-1)、VRP(10μmol·L-1)处理48h和96h后，K562/G01细胞mdr-1基因表达均较未经药物处理组K562/G01细胞mdr-1基因表达减低(P<0.01)；96h组均低于48h组(P<0.01)；Nef(8μmol·L-1)处理48h或96h K562/G01细胞mdr-1基因表达分别较VRP(10μmol·L-1)48h或96hK562/G01细胞mdrl基因表达无统计学差异(P>0.05)。
结论：(1)Nef对K562/G01细胞及K562细胞均有抑制细胞增殖的作用，且与剂量有关。(2)Nef通过下调K562/G01细胞的mdr-1 mRNA表达水平，使mlir-1产物P-gp减少，细胞内药物蓄积增加，导致药物敏感性增强，从而部分逆转K562/G01细胞对STl571的耐药性。