目的:骨肉瘤是一种青少年患者最常见的骨的原发性恶性肿瘤,手术切除肿瘤是骨肉瘤综合治疗中最重要的一部分,而化疗一直是最重要的辅助治疗手段,化疗不但能杀灭残留或扩散的肿瘤细胞,也对控制肿瘤复发有效。近期研究表明骨肉瘤患者治疗过程中均有不同程度的耐药。通过临床观察及查阅文献,发现导致患者死亡的原因主要是肺转移,其中耐药的产生是骨肉瘤远处转移的重要原因之一。因此,由MDR-1/P糖蛋白介导的多药耐药机制对治疗效果的影响引起了广泛关注。目前,以MDR-1/P-gp为基础逆转恶性肿瘤耐药是目前一个研究热点。P糖蛋白(P-gp)是由多重耐药基因(MDR-1)编码的膜糖蛋白,它可以消耗ATP将进入细胞内的药物泵出细胞外,消除药物对肿瘤细胞的杀伤作用,导致肿瘤细胞产生抗药性。但P-gp不是肿瘤细胞特有的表达蛋白,它在正常组织中也有不同程度的表达,主要见于一些具有分泌、排泄功能的组织或器官。P-gp在病理上,可以促进肿瘤细胞内的药物泵出细胞外,从而介导肿瘤MDR的产生,在生理上,减少组织细胞对外源性毒物吸收,从而保护机体,这也可能是某些肿瘤最初对化疗不敏感的原因。P-gp介导的MDR的逆转剂是目前研究较早、研究最为广泛及最经为典的一种逆转MDR的策略,一直是骨肉瘤治的研究方向之一。此外,P-gp介导的骨肉瘤耐药还与MDR-1基因的表达、细胞信号传导通路、免疫等多方面相关。因此,关于P糖蛋白在恶性肿瘤的表达研究中已趋于白热化阶段。增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)主要反映细胞核内DNA增殖情况,在DNA合成期前期和合成期大量出现,PCNA的大量表达提示肿瘤生长旺盛,一方面反映恶性程度高,一方面反映化疗效果不明显,肿瘤有死灰复燃的可能,因此可以作为判定化疗疗效的一个指标。PCNA反义寡核苷酸是在基因水平通过抑制细胞核内遗传物质增殖的一种最新研制的药物,它将PCNA作为反义核酸治疗的靶分子,抑制PCNA基因表达,使细胞停止增殖或处于静止期。通过反义技术抑制PCNA基因的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖,而对正常细胞影响很小。CD34是一种粘附分子,主要在内皮细胞表达,在细胞间粘附过程中发挥重要作用,是肿瘤微血管(Microvessel density,MVD)常用的标记蛋白,通过计算MVD,可以评估肿瘤血管形成情况,同时它也对肿瘤细胞增殖、分化、迁移具有重要意义。肿瘤的生长,转移需要血液供应营养物质。血管是肿瘤形成一个重要原因,肿瘤血管抑制剂比较容易达到靶细胞,发挥其抗血管形成等作用,并且不易产生耐药,毒性作用小,与化疗药物联用,可以提高传统化疗的效果,通过血管抑制剂,抑制血管生成或促进内皮细胞凋亡,使转移灶处于静止状态,抑制肿瘤的复发和转移。由于抗肿瘤血管形成基因治疗不受肿瘤细胞周期的影响,故而是其他治疗方案的良好补充。目前大量实验证实,P糖蛋白、PCNA、CD34在人骨肉瘤中高表达,且作为肿瘤细胞靶蛋白在各自肿瘤治疗过程中已获取的客观疗效,但肿瘤多药耐药的产生是否与肿瘤增殖相关?是否与血管形成有关,国内报道尚少且存在争议。本研究通过选取51例人骨肉瘤标本,按Enneking分期系统分为I期11例,Ⅱ期20例,Ⅲ期20例。以20例骨软骨瘤作为对照。通过免疫组织化学染色,以P-gp、PCNA、CD34标记的MVD分别代表肿瘤的耐药、肿瘤的增殖及肿瘤血管形成三方面,探讨P-gp蛋白在骨肉瘤中的表达及其与PCNA、CD34的相互关系及临床指导意义。方法:病历资料和肿瘤标本均来自河北医科大学第三医院2007年1月至2012年1月手术切除的骨肉瘤标总共51例,其中有肺转移者15例,无肺转移者36例。发生在股骨者20例,胫骨18例,其他部位13例。采用免疫组化染色方法Envision两步法测骨肉瘤中PCNA与CD34及P糖蛋白的表达。结果:PCNA蛋白阳性表达率:骨软骨瘤组为10%(2/20);骨肉瘤组为58.9%(30/51),差异有显著性。CD34蛋白标记的MVD值:骨肉瘤中MVD值为53.47±6.39;骨软骨瘤中MVD值为18.20±4.55,差异有统计学意义。P糖蛋白阳性表达率:骨肉瘤为45.1%(23/51),骨软骨瘤为5%(1/20)。与对照组相比,P糖蛋白、PCNA、CD34在骨肉瘤组织中的表达明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。P糖蛋白的表达在骨肉瘤的Enneking、复发分期和转移的患者中差异有统计学意义,与性别、年龄、发病部位和肿瘤直径差异无统计学意义;PCNA与骨肉瘤的Enneking分期、肺转移、复发和肿瘤直径差异有统计学意义,与性别、年龄、发病部位差异无统计学意义;CD34标记的MVD与Enneking分级及肿瘤直径相关,而与性别、年龄、发病部位、肺转移和复发无关。Spearman等级相关分析显示P糖蛋白表达强度与PCNA蛋白表达强度呈显著正相关,R=0.581,P<0.05,P糖蛋白与CD34标记的MVD之间相关无显著性。结论:P糖蛋白虽然不是骨肉瘤肿瘤特异性表达的蛋白,但恶性肿瘤其表达明显上调,但仍可作为一个判断肿瘤性质的指标,而且可以评估为患者的预后,为临床医师制合理治疗方案提供一个依据。PCNA可以独立作为判断骨肉瘤患者预后的指标,与P糖蛋白联合应用可能会做出更准确的评估,为临床指导用药提供依据。几乎所有骨肉瘤组织CD34均有阳性表达,意味着恶性肿瘤的发生发展与血管形成密切相关。但其与P-gp表达无相关性。MVD可以作为评估患者预后的独立因素,为临床指导用药,肿瘤的耐药可能与血管的形成无关,或者需扩大样本量进一步研究。骨肉瘤治疗过程中产生耐药,到目前为止是一个没有得到解决的临床难题,对耐药机制的深刻理解深入研究非常重要,只有经多方面的综合治疗,才有可能逆转耐药,提高患者生存期。